二、检验项目
酶免疫测定具有高度的特异性和敏感性，几乎所有的可溶性抗原-抗体系统均可用以检测。它的最小可测值可达ng甚至pg水平。与放射免疫测定相比，酶免疫测定的优点是标记试剂比较稳定，且无放射性的危害。
酶免疫测定商品试剂检测项目最多的为ELISA，可分以下各类：
1、病原体及其抗体的检测病毒感染如肝炎病毒，巨细胞病毒，风疹病毒，疱疹病毒，轮状病毒，艾滋病病毒（HIV）等。细菌感染如链球菌，布氏杆菌等。寄生虫感染如阿米巴、弓形虫、锥虫等。
2、蛋白质如各种免疫球蛋白，肿瘤标志物如甲胎蛋白、癌胚抗原、前列腺碱性磷酸酶，激素如hCG, FSH, TSH, hGH, 酶如肌酸激酶-MB，其他蛋白质如铁蛋白等。
3、非肽类激素如T3, T4，雌二醇，皮质醇等。
4、药物治疗心脏病药物如地高辛，抗哮喘药物如茶碱，抗生素如庆大霉素等。
第三讲 免疫荧光标记技术
一、免疫荧光技术基本原理
免疫荧光技术的原理是利用物质吸收光能后，产生激发态而发光的特性。将具有这种特性的荧光素（异硫氰荧光黄或罗丹明B200)用化学方法结合在特异的抗体或抗原上，又不损害其抗体或抗原活性的一种荧光显微镜下的示踪技术。抗体与抗原的结合是高度特异的，所以只要知道其中的一种因子，也就知道了另一种因子。
免疫荧光技术就是利用上述两种特性，把不可见的抗原抗体的反应（一抗）与被荧光素标记的抗体（抗抗体）反应，变为肉眼可见的荧光，在荧光显微镜下我们所能见到的亮绿荧光，不是标本本身发出的，而是荧光物质受到激发后而发出的亮绿色荧光。
二、免疫荧光技术特点
1、特异的抗原抗体反应，并与形态学相结合，增加试验的特异性和敏感性。
2、利用了物理、化学、组织学、细胞学、生物学等综合性技术，使免疫荧光技术成为一种独立完整的一门方法学。
3、一种荧光抗体可以检查多种抗原抗体复合物。
4、只要知道一种抗体或抗原，就可以知道其对应的抗原或抗体。
三、免疫荧光抗体技术基本类型
1、直接法：只有抗原、抗体两个因子直接参与反应，利用荧光标记的特异性抗体与相应的抗原结合，以此来鉴定未知抗原，此方法优点是简单快速，特异性高，非特异性反应少。缺点是一种荧光标记抗体只能针对一种抗原，敏感性较差和不能检查未知抗体。
2、间接法：此法是利用荧光标记抗免疫球蛋白
抗体（抗抗体），鉴定未知抗原或抗体。
第一步：
用已知抗体、抗原与未知抗原或抗体反应，这步反应是不可见的，反映的沉淀物被固定在组织、细胞上。第二步：
加上荧光标记抗免疫球蛋白的抗体，前抗原抗体沉淀物成为相对抗原和荧光标记抗球蛋白的反应，形成抗原抗体复合物，在根据组织或细胞的发荧光部位来判断。此方法优点是，只要一种标记抗体，能与所有免疫球蛋白对应的未知抗原或抗体反应，敏感性高，缺点是如果抗原或抗体纯度不高，实验可受非特异性荧光干扰。
3、补体法：利用荧光标记抗补体抗体，以鉴定未知抗原或抗体，是补体结合反应的原理。第一步，已知抗体或抗原和未知抗体或抗原反应，第二步，加新鲜补体或新鲜正常人血清反应，第三步，加荧光标记抗补体抗体，则荧光标记抗补体抗体特异的和固定的补体结合。此方法的优点是，只需要一种荧光标记抗补体抗体，就可以检查所有种系的抗原抗体系统。因为补体可被任何哺乳类的抗体抗原系统所固定，并与间接法有同样的优点。缺点是补体不稳定，荧光标记抗补体抗体不能与之固定的补体结合，使试验失败，其次是非特异性荧光强。
四、免疫荧光技术的发展与临床应用
荧光抗体技术已广泛应用于医学和生物学的很多方面，在临床免疫学中主要用于：
1、在细菌诊断中的应用：主要用于鉴定细菌和对抗原结构的研究。如对甲型链球菌的快速诊断和分型鉴定，脑膜炎双球菌的快速诊断等。
2、在寄生虫学诊断中的应用：对于疟原虫、阿米巴、利什曼、纤毛虫、滴虫、钩虫、绦虫、蠕虫等均有不少研究。特别是血吸虫及疟原虫的诊断效果是肯定的。可用已知的寄生虫抗原，检查血清中的抗体，用于寄生虫病的诊断和流行病学调查。也可用于寄生虫感染的免疫学和发病机理等方面的研究。
3、在病毒学诊断中的应用：免疫荧光技术在病毒领域应用最广泛，并且取得很大成就，主要用于病毒抗原在器官细胞内的定位工作，如HBsAg研究就是一例。也用于病毒感染过程的研究，肿瘤病毒的研究和快速诊断的研究。在快速诊断中对流感病毒的快速检出，对乙脑、狂犬病、脊髓灰白质炎、恙虫病等都取得良好的效果；也可用来检查血清中的抗病毒抗体。
4、在免疫病理方面的应用：利用示踪法检查球蛋白的沉积工作已逐渐开展起来，如天庖疮在真皮层基底膜，结节性红斑的沉着在真皮下的纤维层。特别是对于复合物病如：肾小球肾火、类风湿性关节炎、红斑狼疮等利用补体荧光法测定复合物沉着的位置，以了解病变侵犯部位和病变基础。
5、血液中B及T细胞的鉴定。
6、激素和酶的局部组织定位。
7、一些器官移植抗原鉴定。
8、组织中免疫球蛋及补体组分的检测。
9、在诊断自身免疫病方面的应用：
(1)抗核抗体（ANA)：是自身免疫性疾病最常出现的一种抗体，特别是系统性红斑狼疮，阳性率更高，因此常作为辅助诊断之一，其它如类风湿性关节炎、硬皮病、慢性肝炎等血中亦可出现较高效价的抗体。目前，已将此试验作为许多自身免疫病诊断的重要参考。
（2）抗线粒体抗体：在慢性活动性肝炎患者中，如抗体效价在1：256以上可以认为是自身免疫性肝炎。原发性胆汁性肝硬化约有98％出现线粒体抗体，慢性活动性肝炎在31％左右。线粒体抗体在胶原性疾病中可见（2-8％）且效价远较自身免疫性肝炎低。
（3）抗平滑肌抗体：这是对平滑肌组织的特异性抗体，没有器官和种属特异性。其临床意义对于自身免疫性肝炎约82％，急性肝炎早期也可出现抗平滑肌抗体，有人报告早于HBsAg出现。
（4）甲状腺球蛋白的抗体：甲状腺球蛋白是甲状腺腺泡内主要激素贮存形式，形成胶质蛋白。患甲状腺炎时，有大量甲状腺球蛋白从受损的腺泡中外渗，而形成自身抗原，从而刺激机体产生自身抗体。
（5）抗胃壁细胞抗体：具有器官特异性，主要见于恶性贫血和低色素性贫血病人。
（6）其他自身抗体：如抗肾小球基底膜抗体，诊断肾小球肾炎。抗横纹肌抗体可用于诊断重症肌无力，抗肾上腺抗体诊断阿狄森氏病。
