讲述内容:
1、核酸电泳
2、杂交技术
3、PCR技术
4、基因芯片
一、核 酸 电 泳
(一)DNA的凝胶电泳
凝胶电泳是分子克隆的中心技术之一。
1. 琼脂糖凝胶用于分离大于200~1000bp的片段;
操作简单、快速,且分离范围广,分辨率高
2. 聚丙烯酰胺凝胶用于分离5-500bp的片段;
效果好、分辨率极高,相差1bp的DNA片断就能分开,能容纳相对大量的DNA
用于核苷酸多态性的分析
琼脂糖凝胶电泳的基本过程
材料:电泳缓冲液(常用TAE或TBE)、电泳级琼脂糖、溴化乙锭溶液(核酸显示剂)、加样缓冲液(保证核酸不在加样孔中扩散和用于电泳时间的指示系统)、水平凝胶电泳装置及制胶系统、直流电源系统。
基本过程:制胶→放入电泳槽中并加入电泳缓冲液→取出梳子→将适量的核酸样品和上样缓冲液混合并上样于加样孔中→一定电压条件下电泳→合适的时间后停止电泳→取出凝胶进行溴化乙锭染色→凝胶成像系统紫外灯下观察并照相保存结果
注意:溴化乙锭具有致癌性,操作时要带手套
不同浓度琼脂糖的凝胶分离范围
影响DNA在凝胶中迁移速率的因素:
1 DNA分子的大小
2 构象
3 凝胶浓度
4 电压
5 缓冲液



