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培养细胞的观察检测方法
作者:李雅娜 来源:生物秀 时间:2008-5-5

    Giemsa(吉姆萨)染色法
    母液配制: Giemsa粉0.5g,甘油22mL,将Giemsa粉置于研钵内先用少量甘油与之充分混合,研磨至无颗粒;然后将剩余甘油混在一起,56℃保温2h后,加入33mL纯甲醇,混匀,即为Giemsa母液,保存于棕色瓶内。
    染液配制:取9份pH6.8~7.38的Sorensen缓冲液和1份Giemsa母液混合即可。
    染色步骤:细胞标本用甲醇/醋酸固定液固定30min后,用滴管把染液布满玻片上,染色10~15min,用自来水冲去多余染液,空气干燥,二甲苯同名,光学树脂封固。
    染色结果:细胞核染成红色,细胞质染成蓝色。
    注意事项:染液宜现配现用,保存时间最好不用超过48h,Giemsa对pH极敏感,缓冲液pH要调准确。

    3、细胞特殊的染色方法
    【1】Feulgen(福尔根)染色法
    原理:在60℃条件下,DNA分子中的嘌呤碱和脱氧核糖的连键可被1mol/L 盐酸水解打开,游离出的脱氧核糖醛基能与希夫(Schiff)试剂结合,形成紫红色复合物。在此过程中,RNA不受影响,故染色具DNA特异性。准确的温度和盐酸浓度,适宜的水温、时间是成功的关键。水温过度或不足均降低染色强度。
                              此法能对DNA 进行特异性染色
    试剂配制:
    1mol/L HCL:浓HCL 8.5ml + 蒸馏水 91.5ml
    Schiff试剂:母液装入棕色瓶,盖紧,黑纸包裹置于暗处
    染色过程:选用Carnoy固定液
    染色结果:细胞核染成粉红色至紫红色,胞质为无色。

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