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培养细胞的观察检测方法
作者:李雅娜 来源:生物秀 时间:2008-5-5

    二、培养细胞常用的染色方法

    1、细胞固定的基本方法
    固定组织、细胞的目的:
    把组织和细胞的原有结构尽可能完整地保存下来,避免组织和细胞发生降解、自溶、腐败和变形等;同时,固定还可以使细胞的各部分易于着色,适于观察、长期保存和分析。

    固定组织、细胞的原则:
    尽可能选用新鲜培养物;根据检测工具、对象、目的和要求选择固定剂和固定方法。

    固定前的准备:
    各种细胞培养物,如双盖片悬滴培养物、悬液培养物、单层培养物和盖片单层培养物都可作固定材料。

    悬浮细胞:
    离心(800~1000r/min)→PBS/Hanks漂洗2~3次
    贴壁细胞:
    用镊子轻轻取出盖片→PBS/Hanks漂洗2~3次

    注:漂洗的目的是去除血清和附着于细胞表面的残渣,防止其妨碍染色。

    常用固定液
    简单固定液:甲醇、乙醇、甲醛、醋酸、戊二醛、苦味酸、重铬酸钾、锇酸等
    混合固定液:甲醇/醋酸固定液、FAA固定液、Carnoy固定液、Bouin固定液、4%多聚甲醛-PBS固定液等

    甲醇/醋酸固定液:甲醇:冰醋酸为3:1,现用现配,适用于Giemsa染色。
    FAA固定液:90mL 80%酒精+5mL 冰乙酸+5mL 40%甲醛,适用于盖片单层培养的细胞,固定效果好。
    Carnoy固定液:较好的非水溶性固定液,60mL 纯酒精+30mL 氯仿+10mL 冰乙酸,适用于显示细胞化学成分。

    2、细胞常用的染色方法
    H.E(苏木精-伊红)染色法
    原理:碱性染料苏木精和酸性染料伊红分别与细胞核和细胞质发生反应,使细胞的微细结构通过颜色而改变它的折射率,从而在光镜下能清晰地呈现出细胞的图像,并能提供良好的核浆对比染色。

    染液配制:
    染色步骤:
    染色结果:细胞核染成红色,细胞质染成蓝色。

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