活细胞的观察检测方法
1.暗视野显微镜技术观察活细胞(dark field microscope)
原理:利用特殊聚光器使光线不能进入物镜,经过标本的散射光线使物镜被放大,因此在黑暗背景中可呈现明亮的像。
优点:反差增大,分辨率提高,可观察到5nm的微小质点。
应用:观察活细胞内的细胞核、线粒体、细菌和霉菌等。
2.缩时显微摄影术观察
(time-lapse cinemicrophotagraphy,TLCM)
优点:可直接记录活细胞的连续动态变化过程,能非常直观地展现细胞生长过程中的动态变化,如细胞运动、细胞分裂、细胞膜变化、细胞死亡等过程。
缺点:较昂贵
3.体外活细胞染色观察
体外活细胞染色就是在体外培养条件下,用某种染料对活细胞进行染色,而不影响活细胞生命活动的一种方法。利用这种方法,可以对培养物进行染色观察,经染色的培养物还可以继续进行培养。
中性红染色
常用活体染料,一般浓度为1:10000,用生理盐水(或Hanks液)溶解后进行高压蒸汽灭菌暗处存放,可直接浸染活体细胞显微镜下观察或用于细胞的病毒蚀斑,肉眼计数空斑数目。因其毒性大,染色后细胞不能再培养。
结晶紫染色
使用浓度为0.1%,可用生理盐水配制,室温保存。该染料对死、活细胞均着色,故只能测出细胞总数。
台盼蓝染色
用0.5%浓度的台盼蓝(trypan blue),用PBS配制,室温保存,该染料只对死细胞着色,可测定活细胞数和计算存活百分率。





