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培养细胞的观察检测方法
作者:李雅娜 来源:生物秀 时间:2008-5-5

    结果分析
    细胞密度
    细胞数/ml=(4大格细胞数之和/ 4 )×104×稀释倍数
    细胞存活百分率
    细胞活力(%)=未着色细胞数÷总细胞数×100%

    2、细胞生长曲线
    细胞生长曲线是细胞培养实验中最基本的指标,是观察同一代细胞的增殖过程。根据细胞生长曲线分析细胞增殖
    方法一:在同一规格的培养瓶中,接种同等量的同一代细胞,经培养后每隔24h取出几瓶细胞进行计数,以培养时间为横坐标,不同时刻的细胞数为纵坐标,即为该细胞的生长曲线。
    方法二:四氮唑盐(MTT)比色法

    3、细胞分裂指数
    细胞分裂指数是表示细胞增殖旺盛程度的指标;以被测1000个细胞中的分裂细胞数来计算。
    方法:染色后血细胞计数板计数
    细胞分裂指数=细胞分裂相数/细胞总数(1000)×100%

    4、克隆形成率
    克隆形成率所计数的细胞必为贴壁和有增殖能力的细胞,反映细胞群体依赖性和增殖能力。
    各种细胞克隆形成率差别很大,一般初代细胞克隆形成率弱,传代细胞系强;二倍体细胞克隆形成率弱,转化细胞系强;正常细胞克隆形成率弱,肿瘤细胞强。
    方法
                    克隆形成率=克隆数/接种细胞数×100%
    注意:细胞要分散好,不能有细胞团,接种密度不要过大。

     四、细胞生物活性的化学检测法

    1、四氮唑盐(MTT)比色法
    原理:活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能将MTT黄色溶液还原成不溶性的蓝紫色结晶物,并沉积于细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)和酸化的异丙醇或酸化的SDS等均能溶解细胞中的紫蓝色结晶物,用酶联免疫检测仪,在490nm波长处测定其光吸收值(OD),可间接反映活细胞数量。在一定细胞数值范围内,MTT结晶物形成的量与细胞数成正比。

    此法已广泛用于生物活性因子的活性检测、细胞毒性实验、抗肿瘤药物筛选和肿瘤放射敏感性测定等。

    2、细胞蛋白质含量测定法(考马斯亮蓝测定法)
    原理:考马斯亮蓝在酸性溶液与蛋白质结合后,在595nm波长处呈现最大吸收量,其吸光值与蛋白质含量呈正相关。
    此法主要用于测定酶、受体及细胞外代谢产物特异性活性的度量单位。

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