二. 电转移：
通常有两种方法：毛细管印迹法和电泳印迹法。毛细管法转移效率较低。现在多用电泳印迹法，这种方法是用有空的塑料盒有机玻璃板将凝胶和硝酸纤维素膜夹成“三明治”状，而后浸入两个平行电极中间的缓冲液中进行电泳，选择适当的电泳方向就可以使蛋白质离开凝胶结合在硝酸纤维素膜上。
转移膜的选择：Western Blot印迹常用的转移膜主要是硝酸纤维素膜（Nitrocellulose Blotting Membranes，NC）和偏二氟乙烯(PVDF膜,Polyvinylidene-Fluoride），此外也有用尼龙膜、DEAE纤维素膜做蛋白印迹。膜的选择要根据a.膜与目的蛋白分子的结合能力（也就是单位面积的膜能结合蛋白的载量），以及膜的孔径（也就是拦截蛋白的大小）；b.不影响后续的显色检测（也就是适和用于所选的显色方法，信噪比好）；c.如果后继实验有其他要求，比如要做蛋白测序或者质谱分析，还要根据不同目的来挑选不同的转移膜。
几种膜的特点：
1. 硝酸纤维素（NC）膜
硝酸纤维素膜是蛋白印迹最广泛使用的转移介质，其优点是对蛋白有结合能力强，适用于各种显色方法，包括同位素，化学发光（Luminol类）、常规显色、染色和荧光显色；背景低，信噪比高；使用也很简便，不需要甲醛预处理，只须在无离子水面浸润排出膜内气泡，再在电泳缓冲液中平衡；而且容易封闭，也不需要特别严谨的清洗条件。转移到NC膜上的蛋白在合适的条件下可以稳定保存很长时间，但是纯的硝纤膜在比较脆，容易卷，不适合用于需要多次重复清洗的用途。选择硝纤膜时要注意的是选择合适的孔径，通常20KD以上的大分子蛋白用0.45um孔径的膜，小于20KD的话建议选择0.2um的，如果小于7KD的话最好选择0.1um的膜。另外由于NC膜上结合的蛋白会因为一些去污剂而被代替，因此在封闭时最好使用较温和的Tween20，而且浓度不要超过0.3%（据说0.05%效果最好）。常见生产公司有Schleicher & Schull；Millipore；PALL Invitrogen、GE（Amersham）、Santa Cruz 等
2.尼龙膜 尼龙膜更多是用于核酸的转移，也有见于蛋白印迹。与NC相比，优点是结合力强，结实，柔软不易卷曲，机械强度大，便于操作。缺点是背景高，而且当转移缓冲液中存在有SDS时蛋白质容易从尼龙膜上泄漏（通过甲醛固定可以缓解这一情况）。另外，不能直接染色.
但是有些公司如pierce有的产品保有尼龙膜高灵敏度的优点和摒弃背景影响大的缺点，采用了合适的signal-to-noise 比例来调整，从而达到了200ug/cm2的蛋白结合能力，同时有比大多数尼龙膜甚至比一些NC膜都要小的低背景
