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组织培养细胞生物学
作者:未知 来源:生物秀 时间:2008-4-8

    2.S 期:
    即DNA 合成期,主要机能活动为进行DNA 合成。各种细胞DNA 合成持续时间差别不大,比较恒定,平均6~8 小时,除用抑制DNA 合成药物如5-氟尿嘧啶等外,细胞一旦进入S 期,DNA 合成过程一经开始,大多能持续进行,独立性较大,对环境不利因素有一定耐受能力。但DNA在进行合成时,多核苷酸双链发生分离,在此阶段,易受致突变或致癌因素作用;DNA 合成期是遗传物质易受致突变物损伤的时期。
    3.G2 期:
    发生在DNA 合成后和本次细胞分裂期之前,故也称DNA 合成后期或细胞分裂前期。细胞进入G2 期后,DNA 含量已加倍,具有4 倍量的DNA。在G2 期主要的变化是与细胞分裂相关的RNA 的合成和染色质的螺旋化。本期持续时间较短,平均2~5 小时。G2 期对外界环境敏感,易受温度、pH 及各种其它因素的影响而受阻不能进入M 期,但不利作用消除后却能很快恢复。
    4.M 期:
    即细胞有丝分裂期,组织培养细胞分裂仍以有丝分裂方式进行增殖。M 期结束形成两个子细胞,是细胞增殖周期的终结期。处于分裂中的细胞叫分裂相,在生活状态下可以直接观察到(见照片8-6)。组织培养细胞是研究细胞有丝分裂过程理想的对象,活细胞的分裂相形态和分裂过程,在相差显微镜下可清晰观察到。细胞分裂过程分前中后末
    四期,活细胞分裂过程表现如下:
    ①前期:G2 期结束后的细胞是如何过渡到前期的,尚难确定出明显的标志。用缩时逐格显微摄电影技术显示,细胞核发生转动可能是前期的开始。当染色体在核中出现并愈来愈清楚时,证明细胞已进入分裂前期。稍后,核膜和核仁突然解体消失,染色体遂混于细胞质中并呈现活跃的运动(类似布朗运动)。与此同时,整个细胞也显现活跃的运动;从细胞膜表面向外伸出很多长短不等的突起,它们引起彼伏犹如液面沸腾,蔚为壮观。此时细胞质逐渐回缩,细胞体趋于变圆,遂与底物附着面减少,易脱落入培养液中。染色体内分散状态渐向细胞中央部移动,然后突然“冻结”于赤道平面,到此前期结束,中期开始;前期持续时间20~30 分钟。
    ②中期:细胞进入分裂中期后,胞质进一步回缩,胞体呈圆球形,与支持物附着面缩小达极限。如于此时摇动培养瓶壁,在培养液的冲击下,细胞极易从瓶壁脱落,依此可作为收集中期分裂相的简易方法。由于中期细胞呈圆形,折光性强,在镜下极易识别。染色体集中于过道平面后,失去明显的运动;中期染色体集聚在赤道平面上称中期板(Metaphase Plate)。中期板有一定的方向性,即中期板常与支持物平面相垂直,两中心
    体分别们于两端(极),此现象可能与两中心体密度较大有关;镜下观察呈“一”字形。细胞分裂中期持续20~30 分钟。本期细胞对外界因素敏感,易受外界因素如秋水仙素作用发生阻滞、延缓或停止向后期过渡。
    ③后期:一旦中期板染色体开始一分为二,即标志后期开始。接着染色体分成两组分别向两极移动,与此同时整个细胞由圆球形逐渐变成椭圆球形;在赤道部并出现绞窄,胞体呈哑铃形。后期时两组染色体相互分离,是细胞分裂过程中最快的,仅持续5~7 分钟,在显微镜下可直接观察到。
    ④末期:此时两组染色体已达于两极,胞体中部进一步变细。继之一切变化与前期相反;染色体变成染色质、核仁核膜再现、胞体逐渐分离、形成两个子细胞,但两者间仍有细丝相连,经过较长时间后才彻底分开。两个子细胞独立后,细胞质又复延展附于底物变扁,整个细胞又恢复成原有状态;末期持续时间20~30 分钟。细胞分裂全程持续时间一般为30~60 分钟,但因细胞种类不同和温度的变动,分裂时间可有一定差别。另外在长期传代或培养环境中某些因素影响下,经常见有异常分裂现象,如三极分裂或多极分裂等。
    正常细胞的一次增殖过程,以分裂结束形成两上相同的子细胞后而告完成。这既赖于细胞质、遗传物质复制和细胞分裂三个过程的完成,也依赖于它们之间的相互协调性。受精卵开始增殖可无G1 期,是因其胞质富余,一旦达一般细胞大小时,G1 期便将再现。没有细胞质的合成只有遗传物质的合成,细胞也不能生存。细胞质和细胞核分裂的不协调,如只有胞核分裂而胞质不分裂,反复经过几个细胞增殖周期后,可导致形成多核巨细胞。另有一种异常的分裂叫核内有丝分裂( Endomitosis ), 又称内复制(Endordduplication),即仅有DNA 的复制,而无核分裂现象,经下一次细胞增殖击期或经过几个细胞增殖周期后才出现分裂,可导致产生多倍体(Polyploid ),并常伴有双染色体(Diplochromosomes )现象(照片1-1)。上述几种异常分裂,在体外培养细胞尤以无限细胞系和肿瘤细胞系等是比较常见的。
    (二)功能态(Functional State)
    功能态为细胞进行特定功能活动如分泌、传导、吞噬、收缩等的时期,是细胞的第二种生存状态。细胞完成特定功能是在细胞发生分化基础上完成的。因此,细胞功能态也是细胞的分化态(Differtentiation State)。功能态存在于细胞分裂之后,G1 期前,也即在两次增殖态之间。若从细胞增殖态周期角度看,功能态是两次增殖周期之间的间期(Interphase)或G0 期。同一G0 期,由于细胞的不同,其生物学的意义是不一样的。以功能活动为主的细胞的G0 期是功能期;以增殖活动为主的细胞的G0 期则是名副其实的间期。传统GSM 增殖周期概念中,把G0 期归属于G1 期,视为G1 期的阻滞。本书以G1s 表示阻滞的G1 期,显然更为合理。
    细胞的增殖态和功能态是相对的状态,能发生交替和有相互依存的关系。根据这两种状态属性的不同,可把细胞分作如下三类:
    1.活跃增殖细胞:
    这类细胞是以增殖为主的细胞,它们增殖频繁,具有较短的G0 期,无分化现象。从而它们的G0 期最为符合间期概念,故可称之为G0i(G0 of Ineterphase:G0i)。体内各种干细胞、肿瘤细胞和体外培养细胞均属之。本型细胞在体外易于培养,成活率高。

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