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组织培养细胞生物学
作者:未知 来源:生物秀 时间:2008-4-8

    细胞质中的其它结构如线粒体、内质网、高尔基氏复合体、中心体和溶酶体等多集中在细胞内质。线粒体形态结构与体内细胞相似,但常随细胞生长状态不同有很大变化;在机能状态良好的细胞中,呈杆状或卵圆形,数量较多,当细胞机能低下或代谢不浪时,能变成颗粒形或集聚成更大的团粒,在光镜下明显可见。
    细胞核超微结构与体内细胞无大差别,核膜仍为双层结构,也能看到核孔。女性细胞核仍可见到Barr 氏体。永生性细胞系和肿瘤细胞的细胞核一般比较大,染色质比较丰富,核仁大而多。

    四、组织培养细胞的生长和增殖过程
    体内细胞生长在动态平衡环境中,而组织培养细胞的生存环境是培养瓶、皿或其它容器,生存空间和营养是有限的。当细胞增殖达到一定密度后,则需要分离出一部分细胸和更新营养液,否则将影响细胞的继续生存,这一过程叫传代(Passage 或Subculture)。每次传代以后,细胞的生长和增殖过程都会受一定的影响。另外,很多细胞特别是正常细胞,在体外的生存也不是无限的,存在着一个发展过程。所有这一切,使组织细胞在培养中有着一系列与体内不同的生存特点。
    (一)组织培养细胞生命期(Life Span of Culture Cells)
    所谓培养细胞生命期,是指细胞在培养中持续增殖和生长的时间。体内组织细胞的生存期与完整机体的死亡衰老基本相一致。组织和细胞在培养中生命期如何?这要要细胞的种类、性状和原供体的年龄等情况。人胚二倍体成纤维细胞培养,在不冻存和反复传代条件下,可传30~50 代,相当于150~300 个细胞增殖周期,能维持一年左右的生存时间,最后衰老凋亡(Apoptosis)。如供体为成体或衰老个体,则生存时间更短;如培
    养的为其它细胞如肝细胞或肾细胞,生存时间更短,仅能传几代或十几代。只有当细胞发生遗传性改变,如获永生性或恶性转化时,细胞的生存期才可能发生改变。对此以后将详叙。
    但进行正常细胞培养时,不论细胞的种类和供体的年龄如何,在细胞全生存过程中,大致都经历以下三个阶段(图1-5):
    1.原代培养(Primary Culture)期:
    也称初代培养,即从体内取出组织按种培养到第一次传代阶段,一般持续1~4 周。此期细胞呈活跃的移动,可见细胞分裂,但不旺盛。初代培养细胞与体内原组织在形态结构和功能活动上相似性大。细胞群是异质的(Heterogeneous),也即各细胞的遗传性状互不相同,细胞相互依存性细。如把这种细胞群稀释分散成单细胞,在软琼脂培养基中进行培养时,细胞克隆形成率(Cloning Efficiency)很低,即细胞独立生存性差。克
    隆形成率即细胞群被稀释分散成单个细胞进行培养时,形成细胞小群(克隆)的百分数。初代培养细胞多呈二倍体核型;由于原代培养细胞和体内细胞性状相似性大,是检测药物很好的实验对象。

    图1-5 正常培养细胞生命期
    2.传代期:
    初代培养细胞一经传代后便改称做细胞系( Cell Line)。在全生命期中此期的持续时间最长。在培养条件较好情况下,细胞增殖旺盛,并能维持二倍体核型,呈二倍体核型的细胞称二倍体细胞系(Diploid Cell Line)。为保持二倍体细胞性质,细胞应在初代培养期或传代后早期冻存。当前世界上常用细胞均在不出十代内冻存。如不冻存,则需反复传代以维持细胞的适宜密度,以利于生存。但这样就有可能导致细胞失掉二倍体性质或发生转化。一般情况下当传代30~50 次后,细胞增殖逐渐缓慢,以至完全停止,细胞进入第三期。

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