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组织培养细胞生物学
作者:未知 来源:生物秀 时间:2008-4-8

    2.功能I 型细胞:
    这类细胞是以完成功能活动为主的细胞,其G0 期是完成功能活动的主要阶段。故本型细胞的G0 期可称之为G0f(G0 of Function:G0f)。体内各种腺细胞、结缔组织细胞、淋巴细胞等属之。在一定条件下,本型细胞尚可重返增殖态;如肝细胞,受损后能重新再进入增殖态,损伤修复后又恢复成功能态,故可称为G0f1 型细胞。本型细胞也可在体外培养,但要求条件较复杂。
    3.功能II 型细胞:
    体内神经细胞、骨骼肌细胞等,是终末分化细胞。它们长期处于G0 期进行功能活动,少见或不进行增殖,这类细胞的G0f 可称为G0f2。本型细胞在体外难以培养和存活
    (成体)。
    (三)体内外细胞增殖和分化调控的差别
    细胞生长与细胞增殖两个概念并不完全相同。细胞生长是细胞质进行合成,导致细胞体积增大,细胞增殖则是细胞数量的增多。细胞群的增殖率主要取决于细胞增殖周期的相继密度和细胞群体中参与增殖细胞数(增殖的细胞/群体),而不在于一个M 期本身持续时间的长短。
    体外培养细胞属活跃增殖细胞,在培养液中营养充分条件下,可反复进行增殖活动,具有较短的G0i 期。但当营养缺乏、尤其是缺乏生长因子时(如降低血清含量),细胞多停滞于G0i 期。此时的细胞由于蛋白质和RNA 的降解、核糖体为单体而非多聚体,酶的活性和越膜活动等较低,因此细胞体积较小。培养中的成纤维细胞当被置于不良状态时,如降低培养基中血清含量,一小时后即进入G0i 期,如再补加血清,又可再返G1 期。从
    阻滞的G0i 期期进入S期所需时间较长,如3T3细胞需12小时。在无G0i 期阻滞时,一次细胞分裂完了,只需6小时便可进入到S期。说明体外培养细胞的生存中,正常情况下,G0i期是很短的。但也随细胞种类不同而异,二倍体细胞较长,永生细胞和肿瘤细胞系较短。体内细胞进入增殖抑或分生分化,均取决于自身以外的调控信号。正常细胞离体培养后,信号来源切断,在培养液中如无促细胞增殖因子或不充分时,细胞便停止增殖。向培养液中补加血清,在于供给细胞所需生长因子,对于正常细胞尤为重要。如细胞发生恶性转化,则出现血清需求降低的现象。研究证明,是与恶怀转化细胞获得能以自泌(Autocrine)方式产生生长因子所致,即细胞具有“自给自足”供生长因子能力。因此细胞降低血清需求可视为细胞恶交的一项指标。

    六、组织培养细胞遗传学特征
    利用组织培养细胞很适于做细胞遗传学研究。细胞遗传学特征是检测培养细胞一项极重要的指标。体内细胞的遗传学特征是比较稳定的,但细胞离体培养后,在培养过程中,却很易发生细胞遗传学变动。因此掌握培养细胞的细胞遗传学动向,是为解细胞性状的一个极重要方面。随着近年细胞融合、免疫组化、原位杂交、基因工作和DNA 重组技术的发展和应用,弥补了细胞遗传学和分子遗传学间的不足,使它们已形成了更加
    完整的体系。但细胞遗传学仍然是了解培养细胞遗传性状最基本和必要的技术,因此利用培养细胞进行研究的工作者,必应具有一定细胞遗传学知识。
    (一)核型变化
    染色体、染色质和脱氧核蛋白是细胞中同一遗传物质的不同的存在形式(图1-9)。间期细胞核中的染色质在细胞进入分裂时变成染色体;在分裂中期时染色体呈标准形态是研究染色体形态结构最好的阶段。人体体细胞具有二倍体核型(照片1-2),在组织培养中呈二倍体核型的细胞群体称二倍体细胞( Diploid Cells),染色体数目为46(2n)(照片1-3)。能维持培养细胞保持二倍体状态的培养方法称二倍体细胞培养。初代正常培养细胞多呈二倍体,通过传代成细胞系后,在培养条件良好的情况下,二倍体细胞可能长期保持二倍体状态。但体外细胞培养环境的稳定性是相对的,细胞经过长期传代后,会发生偏离二倍体现象,即染色体数变成多于或少于46。但只要具有二倍体核型细胞数在这一群体中仍居优势,即占75%以上时,这样的细胞系或细胞株仍可视为二倍体。当细胞发生转化、恶变或原来即为肿瘤细胞的情况下,大多失去二倍体核型,成为多倍体(Polyploid)、异倍体(Heteroploid)或其它形式的变化。其中以异倍体居多,培养细胞经常发生着异倍化,可视为是细胞随环境的变化呈现自然选择和淘汰的过程。结束导致在细胞中可存在几个不同核型的细胞系;当某一核型的细胞,在该细胞群中居多数时,具有该数值染色体数的细胞群即称为干系(Stem Line),也叫众数或主流数(图1-10)。主流细胞可能是有生长优势的细胞群。不同细胞系(或株),或同一细胞系处于不同代,它们的主流数皆可有别。困此实验者对长期使用的细胞或新引起的细胞,应做定期核型检查,以掌握细胞的遗传动向。
    在各类培养细胞中,有时可见到异形染色体,如双着丝点、环形染色体、长臂或短臂缺失等。当某一特殊形态的染色体不断反复出现并点有很大比例时,这种染色体可称之为标记染色体(Marker Chromosome),可作为描述细胞群细胞遗传学特征和改变的一项标志。
    (二)永生化(Immortolization)和恶变(Malignancy)
    细胞永生化也称不死性,是细胞获得持续生长增殖能力的特性。而恶性细胞不仅能长期增殖生长并有异体接种致癌性。已如前述,在体外培养的正常细胞有两个主要的特征,一是具有二倍体核型,二是增殖生长期是有限的。而永生化的细胞则具有无限增殖生长性,长期传代不死,并多伴有核型改变。早年曾把永生性和恶变视为同一,近年研究证明两者是细胞两种不同的性状。永生化的细胞不一定具有恶性,但却易进一步演变
    成恶性细胞,因此人们认为永生化可能为癌变过程中的一个阶段。关于永生化和恶变的检测技术方法将在细胞转化和癌基因章节详述。

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