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组织培养绪论和基本理论知识
作者:未知 来源:生物秀 时间:2008-4-8

    ⑤培养细胞携带有与体内细胞同等的基因组(Genome),也是分子生物学和基因基因学的研究对象;细胞培养技术已是分子生物学和基因工程的重要组成部分。
    ⑥易于施用物理、化学和生物因素等进行实验研究。
    ⑦可同时提供大量生物性状相似的实验对象,耗资少,比较经济。
    ⑧已成为生物制品、单克隆抗体生产和基因工程制品等的生产手段。
    当然,组织培养做为一种技术,也有其不足。主要是组织和细胞离体以后,独立生存在人工培养环境中,即使当前模拟体内技术发展很快,但与体内环境相比,仍有很大差异。因此在利用培养细胞做实验对象时,不应视为与体内细胞完全一样,把实验结果外推至体内,轻易做出与体内等同的结论。
    组织培养仍在发展中,很多技术日臻完善,随分子生物学、基因工程的不断发展和对细胞分化认识的日益深入,我们相信,最终必能创出与体内更加相似的条件,使组织培养的应用价值更大。

    三、组织培养发展简史
    一切事物都有一个由简单到复杂的发展过程,对组织和细胞的研究经历了四个世纪;其中组织培养的发展也经历近百年时间。回顾这些历程,不仅增加些常识,也可能从中得到一些启迪,利于推动这一技术向更高水平迈进。早期组织培养,据文献记载,最早是德国人Roux(1885)曾用温生理盐水在体外培养鸡胚组织并使之活了数月之久,这被认为是组织培养的萌芽试验。1903 年Jolly 用盖片悬滴培养法,培养蝾螈白细胞生活了近一个月。1906 年Beebe 和Ewing 用同样方法以动物血清做培养基,培养狗淋巴细胞存活了72 小时,并曾见到细胞生长现象。人们从上述试验得出一个重要的结论,即组织或细胞离体以后,在人工培养条件下,仍然能够生存。因此这些早期的培养法,今天看来虽很简陋,却为以后组织培养的建立和发展提供了依据。
    (一)现代组织培养的建立(图1-2)
    一般认为现代组织培养是从Harrison 和Carrel(1907;1912)两个开始的。Harrison参考前人经验,创建了盖片覆盖凹窝玻璃悬滴培养法。此法的基本技术是在无菌条件下,
     
    图1-2 组织培养发展意图

    采用淋巴液做培养基,培养蛙胚神经组织生活了数周,并曾观察到神经细胞突起的生长过程。由此建立了体外培养组织和细胞的基本模式系统。但要维持细胞在体外长期生存和生长,还必须克服污染和解决营养问题。Carrel 是外科医生,在实验中特别注意无菌操作。他用血浆包埋组织块外加胎汁的培养法,并采用了更新培养基和分离组织的传代措施,从而完善了经典的悬滴培养法(Suspension Culture)。Carrel 用这种方法,曾培养一鸡胚心肌组织长达数年之久。这些创造性的工作充分揭示,离体的动物组织在培养条件下,具有近于无限的生长和繁殖能力;并充分证明,组织培养的确是研究稍大组织和细胞的极好方法。

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