实验步骤
1、悬浮生长的细胞在培养的状态下加入Heochst 33342 ，终浓度为1ug/ml； 37℃孵育7—10min。
2、低温500 ～1000r/min离心5min弃去染液。
3、加入1.0ml PI染液，4℃避光染色15min。
4、400目的筛网过滤1次。
5、流式细胞仪分析：Heochst 33342用氪激光激发的紫外线荧光，激发光波波长为352nm，发射光波波长为400 ～500nm，产生兰色荧光；PI用氩离子激光激发荧光，激发光波波长为488nm，发射光波波长大于630nm，产生红色荧光。分析兰色荧光对红色荧光的散点图或地形图。
6、结果判断：在兰色荧光对红色荧光的散点图上，结果为：正常细胞为低蓝光/低红光，凋亡细胞为高蓝光/低红光，坏死细胞为低蓝光/高红光。
注意事项
1、在红色荧光对兰色荧光散点图上，还可见到细胞凋亡区向细胞坏死区迁移的轨迹，可能是凋亡细胞的DNA进一步降解的缘故。
2、用Heochst 33342染料与细胞孵育的时间不宜过长，一般控制在20min之内为宜。如果太长可引起Heochst 33342的发射光谱由蓝光向红光的迁移，导致红色荧光与兰色荧光的比例改变，从而影响结果的判断。
网友[awei]：
ATP含量测定，目前已经被大家接受为一种细胞活力检测指标，国外的相关文献已经有不少，我也是从文献知道的。目前国外已经有几家公司专门卖这种试剂盒了，国内也有，好象是壁云天公司。其原理是荧光素酶与荧光素反应时需要ATP，当用饱和浓度的荧光素酶和荧光素反应是，其发光量于ATP之间是存在定量关系的，具体来讲是它们的LOG值呈线性相关，这样就可以通过荧光值得到ATP的含量了。一般来讲，样品中的ATP量是不大的，因此一般情况下是不需要荧光素酶的饱和剂量，这样太浪费试剂，但个别情况下ATP含量奇高，就需要这样作了。我做过几次，实验的可重复性明显好于MTT。在作MTT时由于它的变异度较大，不得不加大样本量，但ATP含量测定其稳定性较好，样本量一般不需要很大，我一般每一个分组有四，五个样品足够了。
网友[jjw703]：
1、台盼蓝染色法，对于悬浮细胞来说，还比较方便，对贴壁细胞来说，较为繁琐。因为要消化，有时，96孔板不一定能消化干净。而且，该法是测定细胞浓度的方法，与细胞悬液的体积有关，加入的胰蛋白酶或1640要计入终体积。可以说，该法相对准确，可能有一些人为因素的干扰。
2、克隆（集落）形成法，对贴壁细胞来说，较为方便，也较客观。但要注意（1）一定要将细胞充分分散，边摇边加入孔板中；（2）用枪加到孔板时，用力柔和，避免细胞冲到孔板的壁而沉下，导致细胞克隆在孔板的四周较多，中间较少，细胞克隆集中于四周，导致计数误差。
3、MTT法，测定的是细胞浓度，要注意细胞悬液的体积。血清蛋白对实验测定有干扰，要弃上清，加入一定量的SDS或DMSO溶解沉淀物，这两步都会给实验带来误差。而且在96孔上操作，实验孔较多时，加样次数越少越好。所以，该法如斑竹所说，会有误差。
4、CCK－8的实验，只加样一次，实验比MTT法简单，比台盼蓝染色法客观，它的缺点有两方面：
（1）比较贵；
（2）加入CCK8试剂后，一般要放入CO2箱1-2.5小时，保温时间越长，测定A值越高，虽然每一孔的A值都增加了，但不同的孵育时间，测定的IC50还是不同的，但IC50改变不大。
本来细胞浓度测定，测定的细胞浓度是相对值，无论台盼蓝染色法，MTT法，CCK8法都是相对准确的实验，在此意义上，CCK8可以说是比较方便，准确，客观的方法。我们小组的经验是
1、酚红的颜色可能影响实验结果（都是橙黄色），若实验的试剂空白组A大于0.2，则实验体系用无酚红的1640（有售），否则，则不怕/忽略酚红的影响。
2、每次实验，不同孵育时间，A值不一样，以“细胞对照组A＝1.0左右”为最佳孵育时间，每次实验与此统一。
网友[jiyi923]：
给大家介绍一种测定细胞活性的方法，大家可以自己跟MTT比较一下。
原理：Sulforhodamine B （SR）是一种蛋白质结合染料，粉红色，可溶于水。SRB可与生物大分子中的碱性氨基酸结合，其在515nm的OD读数与细胞数呈良好的线形关系，故可用做细胞数的定量。
