网友[MichaelHLee]：
我用的是WST－1法。理论上，WST－1法显色原理与MTT法相似，但是WST－1是水溶性的，MTT是脂溶性的，因此WST－1法比MTT法处理过程要简便，受影响因素少，只需将种好板的细胞的培养基从孔板中弃去，然后加上200微升PBS和20微升WST－1溶液（自己配制的，用PMS和WST－1按一定比例加PBS涡旋混合后，在－4摄氏度保存，避光。），同时加上空白对照。置二氧化碳孵箱中约3小时后，直接在酶标仪下测定OD值，450nm/650（690）nm，然后将值减去空白对照后，对比差值即可。
网友[luopeng]：
MTT法作了很多细胞，感觉对于贴壁细胞效果好，对于悬浮细胞，因要吸弃培养液，很容易造成formazan流失，因而导致实验结果偏差。SRB是一种活性蛋白染料，能与细胞蛋白的碱性氨基酸结合而显色，在490nm~520nm波长处其OD值与活细胞数成良好的直线关系。SRB法已被NCI选定作为筛选抗癌药物的新方法，相对于结晶紫法或目前普遍采用的MTT法，其灵敏度好于结晶紫法，相当或优于MTT法。
除此之外SRB法还有以下优点：
1、操作时间短，细胞固定和染色仅需90分钟左右，而MTT加样后还需培养4小时。
2、没有严格时间限制，在TCA固定后或SRB结合后的细胞均可存放，Monks指出样品保存7天，测定的OD值下降不超过2％。
3、可以测定悬浮细胞，采用16% 的三氯乙酸直接加入培养细胞中能完整酸化固定细胞，较之MTT法或结晶紫法离心取上清的操作，不会带来细胞损失，测定结果更准确。因此选用SRB法对于测定不易贴壁的PC12细胞存活率，结果更灵敏准确，重复性更好。
建议大家可以试一下SRB法，SRB价格也便宜。
网友[moldir]：
我最近也在做MTT，确实很不稳定，组间差异就很大。前面大家已经说了很多了，我觉得还应注意的是：
1、培养基中酚红、人血清蛋白、免疫球蛋白、小牛血清、胎牛血清或马血清和某些添加剂可使OD值增高，影响结果。因此这类物质在进行MTT时应先洗去。
2、加入DMSO后应及时检测，OD值受作用时间的影响较大，颜色会随时间变深。
3、接种细胞数要合适。在应用一种新细胞株时，首先要知道该细胞株的细胞倍增时间，而在应用非分裂的原代细胞（如神经元或肝细胞培养）时，首先要知道该细胞在培养过程中细胞丢失的数量。根据这些信息选择合适的接种细胞数量。在MTT法进行时，96孔板中每孔的细胞数量宜控制在5×102～5×104范围。
4、每孔内各区的细胞生长不均匀可直接影响实验结果。当加药液或换营养液时，药液或营养液沿孔边缓慢加入，但不能直接加在细胞上。细胞培养的每一步操作时尽量避免产生细胞生长不均匀的各种因素。
网友[zoumiejie]：
前面有位前辈提到PI染色检测细胞活性，我也是做细胞培养测药物作用后细胞活性的，前一段时间在网上查到一点PI方面的资料，希望有帮助。
流式细胞仪检测细胞凋亡——Heochst 33342/PI双染色法
来源：生命经纬
基本原理
经固定的凋亡细胞其染色体荧光染料的DNA可染性性下降。细胞一经固定就不再是活细胞，而且细胞固定过程对细胞膜的通透性也有影响。因此发展了用“细胞活性”鉴定染料染色的流式细胞仪检测方法。这些方法细胞不经固定就直接用DNA染料染色，且染料的浓度要比固定细胞所用的浓度要低得多。流式细胞仪通常根据细胞膜完整性将细胞分为“活细胞”和“死细胞”，因此正常细胞和凋亡细胞归为活细胞。活细胞染料如Hoechst 33342能少许进入正常细胞膜而对细胞没有太大得细胞毒作用。Hoechst 33342在凋亡细胞中的荧光强度要比正常细胞中要高，Hoechst 33342在凋亡细胞中的荧光强度增高的机制与凋亡细胞膜通透性发生改变有关，凋亡细胞早期细胞膜的完整性没有明显性改变，但细胞膜的通透性已有增强，因此进入凋亡细胞中的Hoechst 33342比正常细胞的多。此外，还与凋亡细胞的染色体DNA的结构发生了改变从而使该染料能更有效地与DNA结合以及凋亡细胞膜上的p-糖蛋白泵功能受到损伤不能有效地将Hoechst 33342排出到细胞外使之在细胞内积累增加等有关。既然Hoechst 33342进入凋亡细胞中比正常细胞更容易，而EB、PI或7-AAD等染料是不能进入细胞膜完整的活细胞中，即正常细胞和凋亡细胞在不经固定的情况下对这些染料是拒染，坏死细胞由于膜完整性在早期即已破损，可被这些染料染色。根据这些特性，用Hoechst 33342结合PI或EB等染料对凋亡细胞进行双染色，就可在流式细胞仪上将正常细胞、凋亡细胞和坏死细胞区别开来。在双变量流式细胞仪的散点图上，这三群细胞表现分别为：正常细胞为低蓝色/低红色（Hoechst 33342+/PI+），凋亡细胞为高蓝色/低红色（Hoechst 33342++/PI+），坏死细胞为低蓝色/高红色（Hoechst 33342+/PI++）。
试剂与仪器
Heochst 33342 染液：用PBS配成10ug/ml的储存液浓度，4℃避光保存；
PI染液 ：用PBS配成5ug/ml浓度，4℃避光保存。
400目的筛网
流式细胞仪
