网友[ichi_only]：
XTT法
XTT{2,3-bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulphenyl)-5-[(phenylamino)carbonyl]-2H-tetrazolium hydroxide}是MTT的一种衍生物，可被活细胞线粒体的脱氢酶还原产生水溶非细胞毒性的Formazan产物而显色，显色程度与活细胞数成正相关。主要优点是反应产物为水溶性，对贴壁和悬浮生长的细胞均适用，检测时间缩短和处理步骤减少，但本底较高，重复性受pH的影响，其它与MTT法相同。
此外还有MTS法
MTS[3-(4,5-diethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-etrazolium,inner salt]为新一代四氮唑蓝盐化合物，其被还原形成的Formazan产物水溶性和稳定性更高，显色更快。
网友[fird]：
其实直接计数法也是一种非常好的方法，至少比MTT来得准确。
首先在10cm的Dish中接种1000-10000个细胞，然后培养1周至2周，消化后，进行计数。此法简单易操作，也非常公认，主要是依靠时间来放大不同处理组的差异，原理与clone formation assay 差不多。
此外，BrdU掺入法也是不错的检测细胞增殖的好方法，原理3H放射性同位素掺入法一样，但可以不接触同位素，用荧光显微镜或FACS即可检测。
网友[mjpl04]：
H3掺入试验、MTT比色法、XTT比色法都属于测定淋巴细胞体外增殖反应的方法吧。我最近也要做关于这方面的实验，就把师兄介绍的测细胞增殖反应时应注意的问题说一下吧：
1、丝裂原的质量和活性是测定淋巴细胞增殖反应的关键因素。因此在实验前，应确定其最佳刺激量。
2、检测T细胞增殖反应，丝裂原用PHA或ConA；B细胞增殖反应用LPS或SPA；T、B细胞增殖反应用PWM。
3、增殖反应的细胞应保持高活性，一般应〉=95%。应用单抗分离制备的反应细胞因保存剂（如NaN3）或抗体的直接作用可抑制细胞的增殖。此外，增殖细胞的浓度过高或过低均不利于细胞生长。
4、细胞培养液应无菌、无支原体污染，特别是小牛血清加热灭活补体，避免LPS或其他能促进细胞增殖物的污染。因此，实验前应选择本底低的小牛血清。用人“AB”型血清或自体血清也应加热灭火补体。
网友[along911811]：
做细胞毒性加药设计和操作一直觉得是个可大可小的问题 ，估计结果重复性差可能有这方面的原因，总结一点自己的惯用手法：
1、首先用培养基将细胞毒性药物（待测药物）5倍，系列稀释，共制备8个浓度。选择浓度时应以最高浓度下多数细胞被杀死，而最低浓度下不会杀死细胞为标准，只要对药物的毒性有所了解，便可采用较小的浓度范围。一般情况下，我每种药物使用三块培养板，这样一次试验中可以有三个平行测定结果。
2、对于贴壁生长的细胞，去除第2-11列个孔中的培养基，这样可以通过将注射器针连在吸引管上来完成。
3、在第2列和第11列共8个孔中，加入200ul新鲜配置的培养基，这些细胞作为对照。
4、在第3-10列的细胞中加入细胞毒性药物，每个药物浓度仅需4个孔，这样A-D 用于一种药物，E-H用于另一种药物。
5、将药物溶液向每组的4个孔中各加入200ul。
6、温育。
网友[kenthern333]：
MTT法测定样品的生物活性，我也曾经做过不少实验。
前期的细胞铺板，样品处理都是很常规的实验室操作。
染色阶段：我们一般是 将MTT用细胞培养液（1640或DMEM）稀释成5%的溶液，过滤除菌，于96孔板中加入10-20ul/孔，再于孵箱中放置4-6hr。
溶解： 可以使用10%SDS或者DMSO。
10%SDS可以直接加入96孔板50-100ul/孔（依据不同实验来确定），再在孵箱中放置过夜，并于酶标仪上在一定波长（570nm左右）下读数。 该96孔板在随后的2-3天内的读数不会有太大的变化。
使用DMSO时，一般需要将96孔板中的上清夜除去，然后加入100-200ul/孔的DMSO。静置20-30mins，于酶标仪上在一定波长（570nm左右）下读数。
DMSO的优点是：仅仅需要30分钟就可以读取数据，实验时间大大缩短。
DMSO的缺点是： 加入DMSO时，先要除去96孔板内的上清夜， 可能会造成细胞的损失，给实验结果带来不必要的误差。
网友[myowneye6788]：
酸性磷酸酶（Acid phosphotase assay）
原理是这样的：
将一种底物（硝基苯磷酸盐）与细胞一起孵育（就是加到96孔板的孔里），细胞溶酶体里面的酸性磷酸酶将底物水解生成另外一种可以显色的物质，用酶标仪在405nm处测量就可以。显色程度反映了细胞里酸性磷酸酶的活性，进而反映了细胞的活力。
这个方法大约十年前外国人发现的，同H3掺入以及MTT也作了比较，提示完全可以代替。而且非常干净。而且很便宜，只需要买底物就可以（5g大约400元 Fluka）。
