网友[spiderman020389]：
做MTT之前，要首先就你所要做的细胞，不加药的情况下，测定细胞作用的时间以及不同细胞数情况下，检测出其OD值，使你的OD值在0.75－1.25之间，也就是找出最优的时间点和细胞数。同样在实验过程中还要注意MTT避光，避免污染，培养基污染，以及细胞数过高过低现象及复孔（我实验过程中每浓度设置了10复孔），好多的细节需要注意，尽管是一个不太杂的实验。
网友[樱桃子]：
1、感觉MTT方法所得出的结果重复性不太好，虽然多次试验的总体趋势是一致的，但每次得出的IC50值相差挺大，结果标准差也相差很大。
2、改用CCK-8，感觉操作步骤简单，这样就减少了操作产生误差的机会。结果也稳定了许多。
3、我个在使用CCK-8中得出的很重要的经验是：如果待测培养系统（如药物）本身是有色的，特别是黄色，那么一定要注意设好对照。因为CCK-8生成的产物也是黄色的，这样会干扰实验结果。设立对照方法如下：
细胞对照孔：细胞+培养液
药物对照孔：药物+培养液 各浓度组药物都要分别设立
培养液对照孔：用于整块培养板调零
4、如果想发SCI的文章，还是选用国际上承认的方法，现在好像MTT发SCI有点悬。
网友[hotgray]：
我做MTT 做了很多，只要你每次的条件摸的差不多，MTT 的准确率还是可以的，虽然每次测得同一个孔的值，都不一样，但是IC50值，差别不大的。我的经验就是要把，孔的倍数拉开，这样就容易形成剃度，IC50值就比较稳定了。之后在在大致的范围内，缩小倍数 ，多次测，可以得到一个可靠的IC50值。
网友[haizhitang]：
我用CCK-8检测原代大鼠肝脏细胞。
实验方法：
1、分离原代大鼠肝脏细胞，以3×105/ml浓度将细胞铺于96孔细胞培养板中，贴壁培养。
2、贴壁培养4小时后，加入待测药物，作用相应时间。
3、每孔加入10ul CCK-8溶液，放入细胞培养箱中继续培养3－4小时，450nm读取吸光值。
注意事项：
由于是贴壁培养的细胞，在读吸光值时细胞培养板底部附着的细胞可能会对数值有一定的影响，因此建议在加入CCK-8 3－4小时后，将上清液重新吸取到另一干净的酶标板中进行读值，保证检测的准确性。
要防止反复使用同一瓶试剂后可能造成的试剂污染。
该试剂盒灵敏度较高，在细胞数较少的情况下也能区别出不同浓度药物作用后的细胞活性差别，比传统的MTT法要灵敏许多，同时，其操作比较简单，节省实验操作时间。
网友[wangzhua]：
SRB，也叫磺基罗丹明B，是在酸性条件下可特异性地与细胞内蛋白结合的染料，SRB染色后不象MTT那样很容易变色，染色后干燥的板子可以放置较长时间，而后再用Tris碱液溶解SRB，比色测定，对结果没有影响。所以，不同时间测试的板子可以同一时间测定，即使溶解后，较长时间测定也没有明显影响。
测定方法：
细胞加药培养48小时后，取出培养板，于每孔加入50ul预冷的50%三氯醋酸，静置5分钟后移入4℃冰箱中静置1小时，取出用去离子水洗5遍，空气中干燥，待完全干燥后每孔加入1%的乙酸配制的0.4%的SRB 100ul，染色20分钟后倒掉染液，用1%乙酸洗5次，去除未结合的染料。空气中干燥后用pH 10.5的10mmol/L的非缓冲Tris碱液150ul溶解，在平板振荡器上振荡5分钟，在BioRad酶标仪上测定各孔在490nm的光吸收。本底对照板的细胞同样处理测定OD490。
有关专家透露，新的抗肿瘤药指导原则中将选用此方法作为细胞毒活性测定的最佳方法。
网友[cox_1]：
最近做过些细胞活性的测定，用过MTT，也用过CCK-8：
MTT：步骤有点烦琐，中间有吸液的步骤会造成不可避免发生误差，特别是加DMOS前的一步，会吸走不少的结晶，后来改进了方法，用2%SDS-HCL溶结晶，不需要去培养基，但是必须37度过夜，耗时比较长。另外MTT反应，这一步，至少需要3小时，如果要做某个药物的急性作用，用这个方法就不太好了。
CCK-8：是MTT的改进，步骤简单，中间不需要吸出孔内的培养基，这样就减小了误差，另外CCK-8反应时间也短，最短1个小时就够了，特别适合做急性作用。缺点是有点贵。
我的疑问是：
1、不管是MTT还是CCK-8，原理基本是一样的，都是发生反应生成有色物，只不过一个是难溶于水的晶体，一个是直接溶于水的。我的问题是，如果做急性作用，是不是可以再缩短反应时间（当然OD值不能太小）？比如，缩短至半小时？另外，最后所测得OD值应该是MTT或CCK-8反应时间内细胞活性的综合反映吧？
2、平行孔的OD值，最科学的分析方法是怎样的？ 有的人把平行孔相差很大的值去掉，只保留比较接近的值，理由是：相差很大的值，很可能是操作带来的较大的误差，不可信。我个人觉得，这样做不科学，但是也找不到很好的解决办法。还希望各位给点意见。
