网友[泡泡游]：
LDH释放法
酸脱氢酶（LDH）在胞浆内含量丰富，正常时不能通过细胞膜，当细胞受损伤或死亡时可释放到细胞外，此时细胞培养液中LDH活性与细胞死亡数目成正比，用比色法测定并与靶细胞对照孔LDH活性比较，可计算效应细胞对靶细胞的杀伤%。本法操作简便快捷，自然释放率低，可用于CTL及NK细胞活性测定及药物、化学物质或放射引起的细胞毒性，现已有LDH法测定CTL活性试剂盒（promega）。应注意较高浓度FCS中所含LDH可能干扰结果。
51铬（Cr）释放法，本法结果准确、重复性好，但也存在以下不足：①使用放射性的51Cr不利于安全操作及废物处置，且需特殊测定仪器；②51Cr自发释放率高，常因不同靶细胞标记效率变化差别大而影响结果判定；③51Cr半衰期（27.8天），无法用于需多次测定的动物试验；④细胞共育时间短而试验操作步骤多，不能在单个细胞水平进行测定。
荧光测定法：
如： alamarBlue一步荧光测定法
alamarBlue为活细胞代谢指示剂，易溶于水，进入细胞后经线粒体酶促还原产生荧光及颜色变化，可用以定量。具体测定方法是：在靶细胞孔（T）、效应细胞孔（E）和实验孔（T+E）各加alamarBlue，共育6～24h后用板式荧光测定仪测530nm（发射）/590nm（散射）波长荧光强度，将T及E孔荧光均值相加后减去实验孔（T+E）荧光均值，与T孔荧光均值比较即可计算CTL对靶细胞的溶解%。本法与51Cr释放法纺织厂较有以下特点：①特异性相当但灵敏度更高，重复性好，组内及组间差异很小。②使用方便，无需预先标记靶细胞及离心和洗涤步骤，适用于大批量样品的高准确性自动测定。③alamarBlue的使用浓度不影响细胞正常代谢及基因表达，可在无菌条件下测定后继续培养扩增细胞，有利于对培养细胞的连续监测及深入研究。④还可测定淋巴细胞增殖或化学物质的细胞毒性及细胞凋亡。⑤多种粘附或非粘附细胞系、细菌、真菌等可用作靶细胞，所需效应细胞数较少（3×105/孔即可）。⑥含胎牛血清（FCS）及酚红的培养液也不干扰测定结果。
网友[大灰熊]：
用MTT法中的一些体会：
1、细胞数要尽可能的多，在细胞数足够多的情况下，可以避免一些上述园友提及的一些误差。
2、要有足够多的复孔，我一般每个剂量设8个复孔。我做了100多块板子后发现只要有足够的细胞数和复孔数，MTT法的重复性还是可以的。前几天测了几种物质对细胞活性的影响，基本上和我在2年前测得结果一致。
总之，我觉得统计学中关于试验设计中要有足够的样本数很重要，大样本数可以极大降低实验中的误差，增强实验结果的可靠性和重复性。
网友[littlenoodle]：
我们课体组是在2004年使用的CCK-8试剂盒，检测原代分离的小鼠T淋巴细胞增殖。之前也使用过[3H]-TdR和MTT法，但由于原代T细胞的特点：1、细胞为悬浮；2、细胞体积小；3、原代细胞存活和增殖较细胞系困难。并且实验中涉及功能阻断，所以我用MTT的精确性不够高，多次用[3H]-TdR考虑到安全性不够好。就改用了CCK-8检测增殖。
我使用96孔细胞培养板，每孔4×105 个T细胞，PHA或ConA加入活化细胞后检测，每孔20μl，注意不要产生气泡，防止影响读板，因为这些小泡即使用针尖也无法消除。放回培养箱，4 h后取出，酶标仪550nm读板，虽然要求的是450nm，但我室没有安装这一波长的滤光片，所以就用了550nm，从结果上看趋势还是很好的。
保存：由于买的量大，所以为维持产品稳定性，先将不用的都保存在－20℃，并且使用过程中尽量避光，用完立即放回4℃。
另外，在培养贴壁细胞（如星形胶质细胞）的过程中，加CCK-8之前可先用水平式离心机去除培养基，加入含10％CCK-8的培养基,培养30 min后检测。这种方法在没有多道移液器，可能导致加入的CCK-8量不同的情况下可供使用。在加入CCK-8后不同时间检测，数值会有所升高，但总的趋势不会变。另外，要像做ELISA一样，在培养板上设立各种严格的对照组，每组3孔，以便去除本底，做出准确的变化曲线。
但所有细胞的活力要求必须要好，否则不增殖，测不出太大的变化。
