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石蜡切片
作者:未知 来源:生物秀 时间:2007-2-27

    提供给实验室的实验用品及每个小组的用量:
    1、 器材
    切片刀,切片机,恒温箱,温台,熔蜡炉,蜡杯,酒精灯,蜡铲,展片台,解剖刀,解剖针,解剖剪,解剖盘,培养皿,吸管,镊子,单面刀片,台木,毛笔,洒精灯,包埋纸盒,染色缸,盖玻片,载玻片,玻片盘,树胶,树胶瓶,显微镜,温度计,脸盆,水浴锅。
    2、 试剂
    卡诺氏固定液、FAA固定液、各种浓度的酒精、二甲苯、石蜡、蜂蜡、埃利希苏木精染液, 1%伊红酒精溶液,1%盐酸酒精溶液,甘油蛋白粘片剂,郝普特氏粘片剂,中性树胶。1%番红,1%固绿,1%过碘酸,Schiff试剂,0.5%偏重亚硫酸钠溶液,醋酸酐-吡啶混合液,0.5%~1%淀粉糖化酶溶液。
    3、 材料
    鼠肝、肾、心肌、骨骼肌或其他组织、大豆或小麦、绿豆、洋葱、大蒜、蚕豆的根、茎、叶等。
    4、 每个实验小组的用量
    (一)器材
    切片机,切片刀,温台,恒温箱,熔蜡炉,水浴锅等这类几个小组用一台就行;解剖刀,单面刀片,小台木,毛笔一只,蜡铲一个,盖玻片和载玻片30个,脸盆一个,酒精灯各一个,包埋纸盒2~3个,染色缸一个,瓷杯3个,显微镜一台。
    (二)试剂
    FAA固定液50ml、1%番红100ml、1%固绿100ml、1%过碘酸100ml、Schiff试剂100ml、亚硫酸盐300ml、醋酸酐-吡啶混合液100ml、0.5%~1%淀粉糖化酶溶液200ml,石蜡半盒、蜂蜡10块、埃利希苏木精染液100ml、1%伊红酒精溶液100ml、1%盐酸酒精溶液100ml、95%酒精5瓶、二甲苯2瓶,甘油蛋白粘片剂数滴,中性树胶数滴。
    (三)材料
    小白鼠一只、蚕豆种,小麦和大豆种10~20粒,洋葱和大蒜由实验室统一种,然后取其所需部分。

    石蜡切片法实例(一)
    —苏木精-伊红对染法
    一、目的要求
    1、 熟悉石蜡切片的制作过程。
    2、 掌握HE染色的基本原理和染色方法。
    二、实验原理
    石蜡切片是最基本的切片技术,冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来的。苏木素与伊红对比染色法(简称H.E.对染法)是组织切片最常用的染色方法。这种方法适用范围广泛,对组织细胞的各种成分都可着色,便于全面观察组织构造,而且适用于各种固定液固定的材料,染色后不易褪色可长期保存。经过HE染色,细胞核被苏木素染成蓝紫色,细胞质被伊红染色呈粉红色。
    三、实验用品
    (一) 器材
    切片机,切片刀,温台,恒温箱,解剖刀,镊子,剪刀,解剖针,单面刀片,小台木,洒精灯,包埋纸盒,染色缸,烧杯,水盆,熔蜡炉,蜡杯。
    (二) 试剂
    卡诺(Carnoy)固定液,埃利希苏木精染液,1%伊红酒精溶液,1%盐酸乙醇液,各级酒精(30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%),二甲苯,甘油蛋白粘片剂,中性树胶。
    试剂配法:
    1、卡诺氏固定液:
    100%酒精3份
    冰醋酸 1份
    或:100%酒精6份
    氯仿 3份
    冰醋酸 1份
    2、埃利希苏木精染液的配法:
    苏木精 1g
    纯酒精 50ml
    冰醋酸 5 ml
    甘油 50 ml
    钾矾(硫酸铝钾)约5g(饱和量)
    蒸馏水 50 ml
    配法:
    ⅰ、将苏木精溶于约15 ml的纯酒精中,再加冰醋酸后搅拌。
    ⅱ、当苏木精溶解后即将甘油倒入并摇动容器,同时加入其余的酒精。
    ⅲ、将钾矾在研钵中研碎并加热,然后将它溶解于水中。
    ⅳ、将温热的钾矾溶液一滴一滴地加入上述染液中,并随时搅动。
    ⅴ、此液混合完毕,将瓶口用一层纱布包着小块棉花塞起来,放在暗处通风的地方,并经常摇动以促进它的成熟。成熟时间约3~4周。若加入0.2g碘酸钠,可立刻成熟。此液稳定而染色均匀,染核效果良好,不会发生沉淀,长期贮备无妨。此液可分别与伊红等进行二重染色。

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