随机引物
适用于长的或具有发卡结构的RNA。适用于rRNA、mRNA、tRNA 等所有RNA的反转录反应。主要用于单一模板的RT-PCR反应。
Oligo dT
适用于具有PolyA尾巴的RNA。（原核生物的RNA、真核生物的 Oligo dT rRNA和tRNA不具有PolyA尾巴。）由于Oligo dT要结合到PolyA 尾巴上，所以对RNA样品的质量要求较高，即使有少量降解也 会使全长cDNA合成量大大减少。
基因特异性引物
与模板序列互补的引物，适用于目的序列已知的情况。天为时 性引物 代公司的SuperScript One-Step System
PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致，或大或小，或者同时出现特异
性扩增带与非特异性扩增带。
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原因 |
建议 | |
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引物 |
引物特异性差 |
重新设计引物，改变引物的位置和长度，增强其特异性或使用巢式PCR |
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引物浓度过高 |
适当减少引物浓度 | |
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Mg2+浓度 |
Mg2+浓度过高 |
适当降低Mg2+浓度，从 |
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耐热聚合酶 |
酶量过多 |
以0.5U为间隔适当减少酶量 |
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退火温度 |
退火温度过低 |
适当提高退火温度或采用二阶段温度法 |
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PCR循环次数 |
PCR循环次数过多 |
减少PCR循环次数 |
4.
5. 最后加入反应模板，加入后盖紧反应管
