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蛋白的裂解与提取方法步骤
作者:未知 来源:丁香园 时间:2007-2-6
    这是偶整理的蛋白裂解和提取的protocol,希望对大家有所帮助。

    10ml 三去污裂解液配方如下:

    50 mmol/L Tris-cl (pH 8.0): 0.07882g

    150 mmol/L NaCl: 0.08775g

    0.2 g/L叠氮钠: 0.002g

    1 g/LSDS 0.01g

    100 mg/L Aprotin 0.001g

    10 g/L NP-40 0.1g

    5 g/L去氧胆酸钠 0.05g

    100 mg/L 苯甲基磺酰氟(PMSF) 0.001g


    总蛋白抽提程序:

    1.PBS洗细胞3 次

    2.加入裂解缓冲液(1.5x106个细胞大约加入100µL 裂解液,或100ml细胞瓶中加入100µL 裂解液),

    冰上放置20min

    3.收集裂解液

    4.离心,12000转,2~10min

    5.吸取上清,蛋白定量,分装,保存在-80度备用

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