1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 组织和细胞的来源：
1.1.2 仪器设备
 机械组织匀浆器
低温高速离心机 (>40,000 g)
超速离心机
超生细胞破碎仪
超纯水装置 

 
1.1.3 试剂
 三氯醋酸 (TCA)
丙酮
二硫苏糖醇 (DTT)
尿素
CHAPS 
PMSF 
EDTA 
乙醇
磷酸
考马斯亮蓝R350  
抑肽素A 
亮肽素

试剂纯度均应是分析纯或以上。

1.1.4 溶液配制 
(1)   PBS： 
NaCl 8 g, KCl 0.2 g, Na₂HPO₄ 1.44 g, KH₂PO₄，溶于800 ml水中，用HCl调pH至7.4，用纯水定容至1 L； 
(2)   EDTA 储存液： 
18.61 g Na₂EDTA·2H₂O，溶于70 ml纯水中，用10 mol/L NaOH调节pH值至8.0 (约需2 g NaOH颗粒)，定容为100 ml。可高压灭菌后分装备用； 
(3)   亮肽素储存液 (50 μg/ml，100×) 
10 mg/ml溶于水，-75℃保存；使用时配成50 μg/ml储液，-20℃保存； 
(4)   抑肽素储存液 (70 μg/ml，100×) 
1 mg/ml溶于甲醇，-75℃保存；使用时配成70 μg/ml储液，-20℃保存； 
(5)   PMSF储存液 (10 mM, 100×): 
17.4 mg PMSF，溶于1ml异丙醇中，-20℃ 保存。 
(6)   DTT 储存液 (1 M): 
0.31 g DTT溶于2 ml H2O中，-20℃ 保存 (DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理，可过滤除菌)。 
(7)   裂解液: 
Lysis buffer A 
(9 M urea, 4% w/v CHAPS, 1% w/v DTT, 0.5% CA and a cocktail of protease inhibitors)

Lysis buffer B
(7 M urea, 2 M thiourea, 4% w/v CHAPS, 1% w/v DTT, 0.5% CA and a cocktail of protease inhibitors)  
Lysis buffer C
40 mM Tris-base (pH 9.5) in ultrapure H2O
Lysis buffer D
(8 M urea, 4% CHAPS, 40 mM Tris(base), 40 ml)

Lysis buffer E
(5 M urea, 2 M thiourea, 2% SB 3-10, 2% CHAPS, 1% w/v DTT, 0.5% CA and a cocktail of protease inhibitors)

Lysis buffer F
100 μL SDS sample solution (1% w/v SDS, 0.375 M Tris-HCl, pH 8.8, 50 mM DTT, 25% v/v glycerol)
●CA、蛋白酶抑制剂混合物和DTT在临用前加入。
(8) 蛋白酶抑制剂混合物[3]

	成分	终浓度
蛋白酶抑制剂混合物	PMSF	35 μg/ml or 1 mM
	EDTA	0.3 mg/ml (1 mM)
	抑肽素	0.7 μg/ml
	亮肽素	0.5 μg/ml

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