1.3单抗免疫球蛋白的类和亚类的鉴定
采用琼脂双扩散法检测。
1.4免疫组织化学
1.人体各种正常组织采用液氮速冻，OCT包埋，冰冻切片，APAAP法染色。
2.AML，CML，ALL，PV，及正常骨髓细胞涂片，丙酮：甲醇=1：1固定90分钟后，常规APAAP法免疫组化染色。
2.结果
2.1杂交瘤细胞系的建立
用人脐静脉内皮细胞免疫的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合后可见杂交瘤细胞生长。融合率为60%。间接免疫荧光筛选内皮细胞（+）/血细胞（-）者移至24孔培养后复测共有6孔上清保持其原有反应性，对其中的一株4D1杂交瘤进行克隆化建系。
2.2抗体类别及亚类
采用琼脂双扩散法测定4D1为IgG1。
2.3单抗的特异性鉴定
通过间接免疫荧光法和免疫组织化学法鉴定4D1与内皮细胞有较强阳性而与血细胞无交叉反应。
2.4 4D1单抗与各种组织的内皮细胞的反应性，见表1。
3.讨论
血管损伤是各种血管性疾病发生发展的一个重要的初始阶段，伴随着血管内皮细胞的脱落，致使外周血中内皮数目的增高。建立一种灵敏的检测外周血内皮细胞的方法一直是研究的热点。综合上述实验结果，作者认为本实验所制备的一株4D1抗人内皮细胞单抗有较强的特异性，它只与内皮细胞有反应而与血细胞无交叉反应，此单抗也许可以应用于临床内皮细胞的检测。
本课题受天津市二十一世纪青年基金和中国医学科学院青年基金资助。
参考文献
表1.4D1单抗与各种组织的内皮细胞的反应性
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人组织 |
内皮细胞反应 |
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脐带 |
+++ |
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乳腺 |
+++ |
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脾 |
+++ |
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胸腺 |
+++ |
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胎肝 |
+++ |
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成人肝 |
+++ |
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肺 |
+++ |
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胃 |
+++ |
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结肠 |
+++ |
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回肠 |
+++ |
