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实时荧光定量PCR(real-time PCR)
作者:赵燕燕 来源:陕西师范大学 时间:2007-12-20

    在Workshop界面下进行程序的编辑。单击左上方的“Protocol”按钮,从文件夹中调出已编辑好的程序,或者点击左下角绿色框中的“Edit”按钮,进入PCR程序设置页面:

    通过左边的“+”或“×”按钮来增加或减少Cycle或Step,并在对应的位置输入各步反应的温度及时间、循环数等。在需收集荧光的Step右方PCR/Melt Data Acquisition选项下点击下拉按钮,选择“Real Time”,即选择在该步收集荧光信号。如许制作熔解曲线,则紧接PCR程序,通过“+”或“×”按钮来添加制作熔解曲线所需的步骤,制作熔解曲线时,需收集荧光的Step右方PCR/Melt Data Acquisition选项下点击下拉按钮,选择“Melt Curve”。

    在Workshop界面下,单击左上方的“Plate”按钮,点击右下角绿色框中的“Creat New”按钮,进入Plate设置页面:

    在Salmple Volume选项中选择:25;Seal Type选项中选择:Domed Cap;Vessel Type选项中选择:Tubles;

    按照Plate设置的位置,将反应管放入PCR仪中的对应位置,在在Workshop界面下,单击左上方“Run Set”按钮,将编辑好的PCR程序与设置好的Plate相匹配,点击右上方的“Run”进入程序运行页面,继续单击“Begin Run”按钮,根据提示,将结果文件保存到特定的文件夹中,反应即进入运行状态。

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