特异性的荧光探针
-特异性的荧光探针是把荧光化合物标记到特异性的寡核苷酸上形成荧光标记的DNA探针。通过探针与PCR产物特异性的结合,在PCR过程中可对产物实现均相、实时、定量检测,也适用于多通道检测。
-TaqMan探针
TaqMan探针是一段5’端标记报告荧光基团(R),3’端标记淬灭荧光基团(Q)的寡核苷酸,其序列与模板DNA中的一段完全互补。
当探针单独存在时,由于荧光共振能量转移的发生,R的荧光受到Q的猝灭。在PCR过程中,由于TaqDNA酶的5’-3’外切酶活性的作用,使探针的5’端的R被切断,加大了与Q的距离而使荧光恢复。
一分子的产物生成就伴随着一分子的荧光信号的产生。随着扩增循环数的增加,释放出来的荧光基团不断积累。因此,Taqman探针检测的是积累荧光。
Cleavage-based assay:TaqMan™
Again, same as the basic PCR reaction.
However, a TaqMan probe is added. Note that the reaction is quiet when intact.
Cleavage-based assay:TaqMan™
The Extension and detection step is a 4 step process.
1) Strand Displacement - The probe and Taq Polymerase comes in contact.
2) Cleavage - The probe is cleaved through the 5’ to 3’ exonuclease activity of Taq DNA polymerase.
