荧光定量PCR和常规PCR技术的区别
常规PCR是通过电泳对扩增反应的最终产物进行定性分析（定量不准确）；
荧光定量PCR是在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，使每一个循环变得“可见”，通过Ct值和标准曲线对样品中的DNA (or cDNA) 的起始浓度进行定量的方法（准确定量） 。
荧光定量PCR的原理
荧光定量PCR检测时,在普通PCR的基础上加入的荧光化合物可分为非特异性的嵌入荧光染料及特异性荧光(引物)探针两大类型。前者是利用嵌入荧光染料检测,只是简单地反映PCR反应体系中总的核酸量,是一种非特异性的检测方法。后者由于增加了探针的识别步骤,特异性、专一性更高。二者各有优缺点,在不同的研究目的中被应用。 （生物秀实验频道 www.bbioo.com）
它们的基本原理是:扩增呈指数增长,在反应体系和条件完全一致的情况下,样本DNA含量与扩增产物的对数成正比,由于反应体系中的荧光染料或荧光标记物(荧光探针)与扩增产物结合发光,其荧光量与扩增产物量成正比,因此通过荧光量的检测就可以测定样本核酸量。
非特异性的嵌入荧光染料（Non-specific DNA binding dyes）
SYBR® Green I
SYBR® Gold
Ethidium Bromide
DNA binding dyes
The intercalation dye begins adding at the Extension step.When the proper wavelength is applied, the fluorescence of bound dyes is very high over background.Sybr Green = 495 nm
非特异性的嵌入荧光染料评价
优点：与特异性的荧光探针相比价格便宜
只需要设计PCR引物
缺点：由于它和模板的结合是非特异性 的，它可以和所有的双链DNA包括引物和非特异性扩增产物结合，不能真实反映目 的基因的扩增情况。
Evaluate Primer Specificity
Using Melt Curve Analysis
Evaluate Primer Pair Efficiencies
By running serial dilutions of template as standards
