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植物总DNA的提取及琼脂糖凝胶电泳检测
作者:刘红梅 来源:山东农业大学 时间:2007-12-18

    背景知识:

    核酸的存在形式:
    脱氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)
    与蛋白质结合在一起以核蛋白(DNP)的形式存在。在制备核酸时通常破坏细胞壁及细胞膜来使核蛋白释放出来。
    植物总DNA包括细胞核DNA和细胞核外DNA,前者存在于细胞核内,后者存在于细胞质中有半自主性复制活性的细胞器内,例如线粒体DNA(mtDNA)和叶绿体DNA(ctDNA)。

    核酸的理化性质:
    DNA为白色类似石棉样的纤维状物, RNA的纯品呈白色粉末或结晶。核酸和核苷酸大都呈酸味。  
    DNA、RNA和核苷酸都是极性化合物,一般都溶于水,不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂,它们的钠盐比游离酸易溶于水。
    在酸性溶液中,核酸易水解,中性或弱碱性溶液中较稳定。

    基本过程:

    细胞破碎→抽提去蛋白质 →沉淀核酸
     
    细胞破碎:
    ①机械方法:超声波处理法、研磨法、匀浆法;
    ②化学试剂法:用SDS处理细胞;
    ③酶解法: 加入溶菌酶或蜗牛酶,破坏细胞壁。  

    DNA提取:
    1.SDS法 SDS是有效的阴离子去垢剂, 细胞中DNA与蛋白质之间  常借静电引力或配位键结合, SDS能够破坏这种价键。
    2.CTAB法 CTAB是一种阳离子去垢剂,它可以溶解膜与脂膜,使细胞中的DNA-蛋白质复合物释放出来,并使蛋白质变性,使DNA与蛋白质分离。

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