第八节 粘片及展片
粘片与展片是将切下的蜡带分割成适宜的片段，用粘贴剂（甘油蛋清或明胶甘油）贴于载玻片上的过程。粘片时必须注意蜡带伸展完全，故粘片与展片都是在载玻片上同时完成的统一步骤，方法步骤介绍于后。
（一）粘片时的用具
1.电热展片台（可用木盒内装电灯泡、酒精灯和金属小平台、三用水箱等器具代替）。
2.载玻片（洁净的）。
3.圆刃解剖刀。
4.眼科银子。
5.蒸馏水（或4%福尔马林液），装入l00ml滴瓶中。
6.蛋清甘油（粘贴剂）。
7.铝质摊片盘。
8.有光泽的白纸。
9.记号笔（蓝或黑色）.
10.纱布。
11.培养皿等。
粘贴剂（蛋清甘油）及其配制法：将鸡蛋一端打开一个小孔，只让蛋白慢慢流入烧杯肉。用玻璃棒（清洁的）充分调拌成泡沫状，然后用粗滤纸或双层纱布过滤至量筒中，经一昼夜（或更长）能滤出透明的蛋白液。再加入等量甘油及少量防腐剂（如棒脑精）振荡使其完全混合后即可应用，不用时需放低温干燥处（如冰箱中）保存，可长期使用。
在使用中应注意以下几点：
（1）教学上使用，应先分装成小指形管中，每瓶在瓶塞上附一细竹棒（粗细与火柴相当)，作蘸取蛋清甘油用。
（2）配制此剂，不要在高温天气配制，否则过滤时间拖长，会使蛋清腐败变质。
（3）蘸一次蛋清甘油液，可涂抹4一5张载玻片，涂的太厚（多）会影响制片质量.
（二）粘片方法及注意事项
1.将展片台〔图2-19（5）〕通电调节恒温约35℃左右。
2.蘸滴极少量蛋清甘油于载玻片的中央，以洗净的右手无名指来回涂沫均匀。每蘸一欢蛋清甘油，可涂4-5张载玻片。
3.将涂蛋清甘油的载片平放于展片台上，并加数滴蒸馏水于载玻片上（水呈均匀散开，若载玻片上蘸水为聚集状，说明玻片不干净，必须另调换清洁玻片）。如用明胶甘油作粘贴剂，则改用3-4%福尔马林液作伸展蜡带用。
4.将已选择的小蜡片，用解剖刀的刀尖蘸水（或用镊子）将蜡片转移至有水的载片中部，当蜡片受热完全伸展看不到有任何皱纹时为止。在展片过程中，要随时注意观察伸展情况，并用解剖刀（或镊子）拨正材料正确的位置，另外要注意温度，不使温度过高而搭化蜡片，或造成蜡片散乱，影响染色及封藏。
5.从台上取下已展片的载片，略为倾斜使多余水分流入培养皿中，同时对位置作最后调整定位：材料无破损、内容较好、伸展平直、无任何纤维丝和渣津的切片，为适合标准的，否则丢弃。
6.将选中的切片继续在展片台上烘熔，使蜡片中心、周围水分都除去，材料紧贴载玻片上，如材料干后有透明质感，表明粘展片工作较好，如有粉质状白色蜡片，说明材料与玻片未贴紧（可能有水汽及空隙引起），这为后续处理（染色、脱水、透明、封藏）带来很多麻烦，因此，必须在酒精灯火焰上较迅速地来回烘姥，直至材料发白处变成透明状而蜡不熔化为止。
7.在粘片、展片过程中，不断将展片台上的合格切片，转移至铝制摊片盘中，然后再转放至40℃温箱中（中部或上层）继续烘熔3天左右方可制片，在放入温箱中的摊片盘，要交叉叠放，这样烘放的数量多，不占温箱内体积，又可避免磨损切片。具有1-2个温箱即可满足一般教学与科研需要。
第九节 脱蜡
（一）脱蜡用具
1.卧式染色缸每人两个，各装二甲苯。一缸外注贴“脱蜡I”，另一缸贴“脱蜡Ⅱ”票贴。
2.眼科领及盖片银各一把。
（二）脱蜡方法
1.将两个装有二甲苯的染色缸，一侧贴以脱蜡、透明字样的票贴，朝向工作者。
2.将待脱蜡的载玻片有蜡带的一面，朝向标签方向，一张张小心插入脱蜡缸的齿槽中，待30分钟（在夏季38-40℃温箱内可减少到15-20分钟即可），当蜡片中材料的周围蜡溶去后，再转移至透明缸中5-10分钟，然后再转入染色、脱水、透明、封藏等步骤。 (生物秀实验频道 www.bbioo.com)
第十节 染料与染色
一、染料的分类
植物制片中使用的染料种类较多，染料的分类法较复杂，根据不同的角度可以将其进行不同的分类。
（一）根据染料的来源划分
1.天然染料由植物或动物中提取，如苏木精、洋红、地衣红等，天然染料垦然种类不多，但在生物染色中普遍使用。
2.人工染料由人工合成。最初的人工染料是由苯胶制成的，称为苯胶染料，目前许多人工合成染料与苯胶并无关系，也不是苯胶的衍生物。但人工合成染料均可由煤焦油中的一种或数种物质制成，故可统称为煤焦油染料。大多数染料属于此类。
(二）根据染料的化学性质划分
1.碱性染料它是一种色碱的盐，通常为氯化物，也有磷酸盐或醋酸盐。它含有碱性助色团氨基或二甲氨基，主要有色部分为阳离子。如苏木精、碱性品红、番红等。
2.酸性染料是一种色酸的盐，通常是钩盐、何盐或钱盐，它含有酸性助色团如羟基、羧基，主要有色部分为阴离子。如固绿、伊红、桔红G、酸性品红等。
3.中性染料或称复合染料，它们的阳离子和阴离子都有颜色。如中位红等.
（三）根据染色的性能而分
1.核染料能与细胞核中的染色质发生作用的染料，包括天然染料的苏木精、洋红及人工染料的番红、甲苯胶蓝、甲基绿、碱性品红等。
2.细胞质染料能与细胞质发生作用的染料，如伊红Y、固绿、桔红G、苯胶蓝、酸性品红等。
3.细胞壁染料能与细胞壁发生作用的染料，如番红、苯胶蓝等。
4.组织化学染料如苏丹E、澳盼蓝、碱性品红、苯胶蓝黑等。
5.荧光染料应用含荧光色团的物质作为染料，使之与细胞中和该物质有特殊亲和力地物质相结合，即可在紫外线或短光波的照射下被激发出荧光，这类染料称为荧光染料（fluorescent dye）专用的荧光染料如H33258、DAPI、FITC、水溶性苯胶蓝、荧光增白剂、荧光素二醋酸酯、金胺O等（详细介绍见荧光显微术内容）。
6.活体染料植物中可用作细胞活体染色的染料，如中性红和许多荧光染料等。
