第七节 切片
一、石蜡块的分割、整修与固着
（一）工具 单面刀片、酒精灯、烫蜡铲、台木、垫桌纸、火柴、切片机、小木板。
(二)方法将桌上垫一层纸，后放置一小木板。分割下的每个小样品四周留3-5mm的蜡边进行整修，每个蜡边与材料尽量呈平行线，上窄下宽，削好的样品，以纸袋包装好，以免科研材料处理弄错，影响试验结果。将坚实平整的台木块，放于垫纸上，再将台木上用烫蜡铲烫放一层稍厚的石蜡，以左手执石蜡小样品块，右手执烫蜡铲于酒精灯上烧热，再放置台木与小蜡块之间，当上下蜡面被烫蜡铲熔化时，很快抽出烫蜡铲，左手迅速将蜡块紧压台木的蜡面固着，然后再用烫蜡铲烧热，使台木与蜡块间稍有一点熔蜡，以便焊紧小蜡块，当台木上的蜡块冷却后，再进一步修整呈上窄下宽的倾斜面，以便最后安放于切片机上切削。有些坚硬的材料在切片前，需将材料切面微露出（没有蜡包被着），将露出的面朝向有水的培养皿中浸泡半天到一天再安装到切片机上切削，这样能达到组织软化，切面达到光滑不碎裂，也无刀痕。在夏季切削时，常用小冰块在蜡块面上冰冻几秒钟后，再进行切剧效果较好。
二、切片机种类
切片机是用于石蜡切片的主要工具，有回转式切片机和滑走切片机两类。这里仅介绍上海仪表厂生产的YL3型回转式切片机，它是目前国内生产的较新产品，价格尚便宜，可切3-4μm较薄蜡带，各部件主要名称用途如图版2-1所示。
使用注意事项：所有各部分都应保持洁净，灌入适当润滑油，保持机械部分润滑运转，不受尘埃、药物污损：每次用毕，须以软毛笔刷去碎蜡等屑块，最后盖上切片机护盖或装入箱内。
三、切片刀的选择与准备工作
每种切片机一般附有1-2把切片刀，若需添购可向当地仪器公司购买适合的类型。如双平面刀：刀两面平直是常用的一类，若用于回转切片机刀较窄而短，用于滑行切片机则刀宽且长。使用时刀口与石蜡块倾角约为15°。 (生物秀 www.bbioo.com)
平凹面刀：刀的一面平直，另一面内凹，四度深的适用于滑行切片机，作火棉胶切片，凹度浅的适用于回转切片机，作石蜡切片E刀口与石蜡块倾角为4°－6°。
双凹面刀：一般少用，常为回转切片机上使用。
磨刀：有机器磨刀和手工磨刀两种方法。目前国内生产有全自动磨刀机和半自动两种。上海型产品属全自动型，使用尚普遍，操作也方便。
手工磨刀法步骤如下：
1.磨刀石与润滑剂选择。磨刀石（天然石）以平滑不含杂质的青石为常用，人工合成磨刀石，价格较高，市场不宜采购，为了节约建设资金，充分利用资源，还是采购天然青石为宜。磨刀前，将青石上的尘埃用布拭净，如为新购回的青石，需用两块青石，面对面相互研磨，这样使两块石面磨平后即可使用。磨刀用的润滑剂，可用液体石蜡代替，向医药公司购置。
2.将切片刀装上刀臂与刀柄，再用吸管滴数滴液体石蜡于青石面上，后将刀刃朝向青石前方，左手紧握刀臂套多余的一端，右手握刀的手柄，在磨动时，两臂膀及手腕应放松，使刀刃刀臂下侧部都自然地紧贴青石表面滑行研磨，研磨中双手都应加压力，两手用力要均匀。
3.左侧刀刃在前，右侧刀刃在后，慢慢推动切片刀刃在青石上全部磨完，紧接着右手持刀柄，左手持刀臂同时翻动，将刀刃向上翻（刀臂不离开青石面），刀刃转向内方轻轻放于右面朝胸部研磨。如此向前向后转动来回研磨，直至刀刃锋利为止，接着进行镰刀。切片刀磨后，必须用牛皮制的僻刀皮镰刀，这样经僻刀后的刀刃锋利，切下的蜡带光滑无刀痕形成。镰刀皮是用宽牛皮裤带剪断，两端钉在平整的方形木棒上，便于双手持刀进行僻刀。镰刀时，刀刃向后拖锵（来回都相同），千万不可向前。
4.刀磨了一定时间后，须在低倍显微镜下检查刀刃是否有缺口，若呈一直线即算磨好。切片刀用后或磨后都须用布蘸二甲苯拭净液体石蜡及尘浆，如磨后不马上用，还必须涂黄油或液体石蜡于刀刃及刀面、刀背，以免生锈，最后将刀放回刀盒放置安全处保存。
磨刀、锵刀、切片、收刀等诸环节，都要特别细心，既不要损伤刀刃，也不要用手或其他脏物拭刀的任何部分，还需注意安全，免手指受伤。
四、切片方法与出现问题的解决
（一）切片方法与步骤
1.用具回转切片机、切片刀、寸楷毛笔（两支）、光洁白纸、解剖刀、银子（眼科）、装蜡袋纸盒、纱布（或儿童手帕）、试剂瓶（内装二甲苯）、手持扩大镜等。
2.装紧蜡块固定锁紧扳手，并调节好角度与距离。
3.安装好切片刀，当倾角为15。左右时，用固定螺旋扭紧。
4.先松开刀架固定钮移动刀架，同时从侧面观看，当切片刀刀刃与台木上的蜡面较平行且接近时进行固定，最后重新检查其他固定螺旋是否紧固。
5.调整切片厚度控制盘的刻度，一般切片厚度约在8-12μm间。6.开启切片机总开关，试摇切片机手轮（顺时针方向摇动），左手持毛笔每摇动一圈，就切下一个蜡片；第一片常贴在刀刃上，当第二片切下时，第一片与第二片的边缘即连在一起，连续摇动手轮，连续蜡带就形成。当蜡带连成一定长度后，用左手的毛笔将蜡带轻轻抬起（尽量避免蜡带与刀面接触），边摇边移动蜡带，待蜡带切下长达20-30cm时，停止摇手轮，另用右手执另一毛笔顺刀刃轻轻取下蜡带，两毛笔托着整个蜡带平放于切片机左侧的白纸上或蜡带盒内。使蜡带靠刀的光滑面向下，无光泽面向上；在粘片时，蜡带在载玻片上放置，也按光面向下（即紧贴玻璃面）的位置贴放。
7.用手持扩大镜先逐一检查蜡带，选出合适的材料以圆刃解剖刀（22号刀片）切断蜡带，保存在蜡带盒内以备粘片。
8.锁紧切片机总开关，进一步检查切下蜡带是否适用。台木上材料不符合要求时，剩下的蜡块不必再切下去，另换上材料继续切片，这样可保护切片刀刃锋利。
注意：在进行切片操作时，要耐心细致，不要对着蜡带讲话，以免气体吹走蜡带，切片过程要随手注意关锁总开关钮，以防止手轮下降伤害人的手指和损坏材料或刀刃。
（二）切片过程易出现的问题及解决办法
1.切片纵裂或具纵条纹 刀有缺口、锦刀时间太短、组织软化不够等原因，都会发生此类现象，可移动刀刃位置，进一步锵刀及重新取下台木，将蜡块倒放在有水的培养皿中浸泡半天，起继续软化作用。
2.蜡带弯曲 是蜡块的上下边缘不平行引起，如将蜡块长边修整为平行的，即可纠正弯曲现象。
3.切片有横纹及厚薄大小不匀 刀夹或物夹松紧不均匀、刀倾角过大（调小到1°－2°），刀口用二甲苯拭去石蜡屑，大小不匀与调节系统出故障有关，应考虑维修切片机等问题。
4.材料破碎，甚至整个材料由蜡中脱离形成空洞蜡带 此种现象是脱水不彻底、浸蜡不完全，因而使材料和蜡之间不融合，形成空洞蜡片，这种材料无法补救，必须重新处理制作。
5.切片卷起形成圆筒 是刀刃太钝并附着不洁杂物、刀的倾角太太、切片厚度太厚等原因所引起的，须镰刀、调整刀的倾角，或用少量二甲苯拭净刀刃等措施。
石蜡切片全过程中，每一环节都会影响切片质量，初学者必须细致操作，及时发现问题予以解决，决不能因其中某步骤出现问题失去信心。
