第三节  脱水
常用的脱水剂有乙醇（酒精）、二氧六环、正丁醇、叔丁醇、丙酮等药剂，其特性在附录2中介绍，这节仅介绍脱水的目的与方法。
目的：
1.除去组织内的水分，并使其组织细胞变硬。
2.脱净水的组织，才能使溶解的石蜡顺利进入细胞内，以便进行石蜡切片。
3.脱水后的组织再经透明剂（二甲苯、氯仿等）透明，最后才能经加拿大树胶封藏，否则组织材料不透明，无法在显微镜下观察。
方法：经各级酒精处理，须具滴瓶（试剂瓶）一套，由30%、50%、70%、85%、
95%、100%、100%各级组成，另须有材料处理瓶（内附滤网的）几套。第四节  透明
目的：透明是制片过程中的基础工作，材料经各级酒精脱水以后，要经过常用的有机榕剂（氯仿、二甲苯等）进行透明，这样便于包埋渍剂（石蜡）及封藏剂（加拿大树胶）进入和溶合。只有当组织材料全为透明剂所占，并在显微镜下观察呈透明状态时，这种材料才符合制片要求，故透明是制片的重要环节，万不可忽视，凡未经透明的材料（不论在何步骤透明）都必须重新退回处理，直到材料透明再继续向下处理。
常用透明剂种类：二甲苯、氯仿、苯、甲苯、丁香油、冬青油、香柏油等，其详细性状与应用，将在附录3中介绍。
透明方法：本教材以氯仿及二甲苯为常用透明剂。氯仿透明的优点是：①组织材料在氯仿中浸存，收缩不显著：②易挥发，如浸蜡时，使用的氯仿经包埋前的处理便于除去，其缺点有：①渗入组织内力量较二甲苯弱、时间长，②氯仿能使染料褪色，故染色后的切片处理不宜用氯仿透明而用二甲苯。
氯仿透明的材料，按材料的大小、透入的难易决定使用不同级别，一般使用三级或五级法。先将材料贴一小纸条作标尺，画成五小格。当各级酒精脱水至无水酒精时（即第二次纯酒精更换完毕时），将瓶内的无水酒精用吸管吸出一格，随之加入氯仿一格，以后按时每次出一格液体，再放进一格氯仿，这样使瓶内氯仿含量逐渐增加 ，当五级（次）换入氯仿后，再换纯氯仿二次，紧接按以下步骤操作。

第五节  浸蜡
    在装有材料地纯氯仿瓶种，加入纯石蜡粉末。其方法是：用单面刀片刮取石蜡屑，加入量宜先少后多，一般分2-3次加入，每加完一次碎蜡后，即放回至恒温箱中部，温度控制在38-40℃之间。浸蜡完全的材料，组织块显得十分透明。这种以石蜡透入细胞组织内的全过程，称为浸蜡。完成浸蜡的组织块，才便于
包埋、切片等工作。
在浸蜡瓶放入温箱中过夜时，要注意材料不能太多，瓶塞不要盖得过紧，一般宜安排在白天进行较为安全。
 
第六节  包埋
包埋是将浸蜡完全的组织和熔解的石蜡，倒入蜡块盒，随之快速冷却定形成蜡块的过程。包埋前需做以下的准备工作：
（一）石蜡的选取按不同的要求选用不同规格的石蜡。软材料用54-56°C熔点的石蜡，若切5μm以下的厚度或炎热夏季切片时，宜用58-60℃的石蜡。石蜡商标上须注明为生物组织切片用蜡字样，选用时还必须检查石蜡细致度、无气泡、无灰尘、无透明点痕、切片时不断碎等优点。工业用蜡，不能使用。
新石蜡和用后已切碎的石蜡，都必须经过先熔化，然后用3-4层桑皮纸，折叠成漏斗形，进行过滤除去渣棒。熔蜡时，必须有人在电炉旁守候，待温度达到70℃左右时，将蜡锅移开电炉，千万不能让熔蜡锅冒出白烟，又无人在炉边，以致酿成火灾。
（二）各级石蜡配制与使用  石蜡配成50%、75%、100%三级。50%石蜡由一半石蜡和一半二甲苯配制而成F75%石蜡系由75%石蜡与25%二甲苯配成。每级石蜡用大口器皿装且有盖覆盖，这样，便于多处理材料和包埋时操作，如用牛奶锅（钢精）或医用消毒搪瓷杯有柄辅锅、不锈钢茶杯等也可。每级石蜡杯外及盖上，都应注明50%、75%、纯蜡A、B、C字样，以免混淆弄错。
（1）经各级石蜡处理恰当的材料，一般都沉入杯底部，如见有材料在蜡内漂浮、色白，这类材料可能由于在抽气时空气未排出，脱水不完全，透明不彻底等环节造成，需单独包埋存放，另作处理。若材料处理数量较多，应予丢弃。
（2）各级蜡杯温度，最好不超过蜡的熔点，温度过高材料会发生收缩变脆，温度过低，透蜡及氯仿排除不彻底，也会影响制片，因此温箱外需有温度计指示温度，蜡杯放置温箱的下层位置，可达到浸蜡包埋要求。
（三）包埋用具的准备
1.将浸蜡瓶（内装处理材料）从温箱中取出，立即倒入自制"活动铜纱底铝质盒"中，此时溶于氯仿的溶解石蜡，从网底漏入纸盒中，材料落于网底。为迅速转移样品曹又不损坏样品，特自制“活动铜纱底铝质盒”。在更换各级蜡杯时只需将提篮提起，漏出溶解蜡，马上即可转移至次级蜡杯，继续置温箱中处理，这样能保质、保量，在最短的时间内，完成大量的任务。
2.装有材料的处理盒，编号后装进铜纱提篮，再转入溶解的50%级石蜡杯中，然后放入恒温箱内的底层，继续浸蜡并加速蒸发残存氯仿，后经75%级蜡及纯蜡A、B、C三杯处理，纯石蜡充满细胞内外位置，为下一步包埋打下良好基础。在包埋前，须将包埋用纯蜡杯，熔解后置于温箱底部，为包埋进行准备工作。
3.叠制包埋纸盒利用印刷厂切下的道林纸头作包埋纸盒最适用，这样可节省时间切纸屑，又可省钱和保证纸的质量，叠成的盒底部，用特种铅笔（即玻璃铅笔，红色为好）注明编号，以免材料弄混。
4.其他用具的准备调温电炉一个，金属温台一个，酒精灯两个，眼科银两把，蜡铲2把，包埋蜡锅一个，蜡勺一个（活络丸盒代替自制），玻璃块（7×1Ocrn）5-10块，粗纸片(5×8cm）若干张，脸盆一个，火柴一盒，以上各物20人一小班可够用，如分几处包埋，需适当增加。 
 （四）包埋方法
1.将电炉调节使蜡熔化达到60-64℃，保持其温度，若温度太高，即将蜡锅移出电炉，转入下步骤。
2.从温箱中取出纯蜡C杯，置于金属台上。
3.将纸片浸水润湿，放于玻璃块上，平放桌上（或水泥台上），再放一个包埋纸盒于湿纸上。用蜡勺挖取熔解石蜡，转入纸盒内，再从蜡杯C中取出铝盒，随之转入有溶蜡的纸盒中，并将样品转入纸盒内，此时较敏捷地用镀尖拨动材料，彼此间留一定距离并整齐排放，这样才便于切割成小蜡块安放切片机上切削。
4.当上述手续完毕时，盒内的蜡面渐渐呈薄膜凝固面，此时可用手拿起玻璃片，先平放于脸盆水i中，当进入脸盆后，玻璃较重便自行与纸片离开，纸盒也随着漂浮水面，这时不要搅动水或翻动蜡块，以免蜡块内的熔蜡流出，造成蜡块厚薄不均匀或蜡块内材料移动。
5.使用过的玻璃片可以反复使用。
（1）已冷却凝固的蜡盒，可从水中捞出，盒底向上，纸干后剥去盒纸，放入已编号酌纸袋中备用。
（2）包埋完毕后的用品，要整理清顺，使用后的铝质网盒，需马上在酒精灯上烘烤，除净多余石蜡，集中存放下次再用。

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