实验目的
掌握动植物材料石蜡切片的方法及要求。
实验原理
见石蜡切片理论部分
实验材料
小白鼠各种器官组织
实验方法
• 石蜡切片技术（一）取材与固定
• 石蜡切片技术（二）渗透与包埋
• 石蜡切片技术（三）切片
• 石蜡切片技术（四）染色
• 石蜡切片技术（五）观察总结
一、取材与固定
1 准备工作：工具、药品、计划等
2 动物的麻醉：氯仿麻醉
3 解剖取材
4 材料分割：保持样品的完整性与代表性，考虑切片方向，实心组织大小5*5*2mm,空心细长组织10mm长。
5 固定：布温氏固定液固定24h。
6 漂洗：70%乙醇换洗3次，每次20~60min。
7 保存：70%乙醇0~4 ℃ 。
二、脱水、渗透与包埋
1 脱水：85%乙醇→95%乙醇→100%乙醇→100%乙醇，每步30min~60min
2透明：1/2乙醇＋1/2二甲苯→二甲苯→二甲苯，每步30min~60min
3 渗透： 1/2二甲苯＋ ½石蜡→石蜡→石蜡，每步20min~60min，温度62℃
4 包埋：将材料放入盛有石蜡的纸盒中，摆好位置（要考虑下一步的修快与切片方向），在水中冷却5～10min.
三、切片
1 修块 用单面刀片在玻璃板上修快使达到以下要求：
（1）一个蜡块含一个材料，蜡块呈正方形或长方形，材料位于蜡块正中央。
（2）材料边缘与蜡块边缘平行，各面要平直，材料边缘与蜡块边缘的距离约3mm。
2 固着 将修好块的蜡块用烧热的解剖刀固着在样品台上。
3 切片 按以下顺序进行
（1）将样品台固定在切片机样品臂上，使切面竖直；
（2）调切片厚度5～10um；
（3）将切片刀用纱布蘸少许二甲苯擦净后装到切片机上，调刀角15～20，将刀固定好；
（4）调刀距 使样品与刀口尽可能靠近；
（5）切片顺时针摇动切片机速度40-60r/min；
（6）将切好的蜡带光面向下用毛笔放到台纸上
4 贴片
(1)清洗载波片；
(2)加粘片剂，要求薄、匀；
(3)放切片，光面向下；
(4)加水于切片下面；
(5)展片将载波片放于50℃的温台上至切片完全展平；
(6)烤干吸掉多余水，继续放于温台上至水完全干燥；
5 贴标签 临时标签，用铅笔写明组号、姓名。
