ABC法实验注意事项：
1 内源性生物素活性及其清除
某些组织和细胞内存在着内源性生物素，在应用该染色方法时会与抗生物素结合而产生非特异性染色。因此，对抗生物素结合性较高的组织，如肝、肾、白细胞、脂肪组织、乳腺等，在进行ABC染色前应预先以0.01%的抗生素和0.01%的生物素溶液分别作用20min，以消除其内源性抗生物素结合活性，每次作用后用PBC洗5分钟。必要时，也可用0.3%H2O2-甲醇液孵育以消除内源性过氧化物酶活性。
2 生物素制剂之间相互亲和性差异很大，因此在应用ABC试剂时，应注意厂家批号，对购买
试剂应进行事先预测，以保证实验结果的稳定性。
3 ABC试剂保存以4℃为佳，据报告保存可达两年之久；而在-20℃生物活性在短期内即被破坏。
四、免疫组织化学技术试剂购买及其保存
（一） 免疫组织化学技术试剂正确选择、购买及使用
1 一抗的正确选择与使用
1.1 首选单克隆抗体：单克隆抗体具有高特异性、高亲和力、交叉反应少等特点，避免与细胞或组织蛋白的非特异性结合，减少染色背景。
1.2 多克隆抗体：最好是经样本来源种属正常血清吸附过，尽可能的减少非特异性着色背景。加一抗前，用封闭液（可以是BSA或二抗来源的正常动物血清）充分封闭，以阻断非特异性结合位点。
1.3 正确使用：一般供应商都会提供稀释范围和使用方法。但由于供应商质检所用组织不同，实验条件和操作人为误差，常常需要客户自己再重新选择比例。一般供应商提供稀释比例从1：10稀释度始作倍比稀释。
2 二抗的正确选择与使用
2.1 种属来源要匹配：根据所用一抗选定二抗。一般来说，如果一抗是小鼠源性，二抗应选择兔/山羊或其它种属抗小鼠的抗体。目前，美国Vector公司和Zymed公司都有开发的用小鼠抗体检测小鼠组织的试剂盒，即一抗来源于小鼠，该试剂盒采用了通用非特异性封闭液和专利封闭内源性小鼠Ig的封闭液，可以得到清晰的染色背景。
2.2 注意抗体同种型和亚型：确定一抗同种型和亚型后，可以选择抗一抗来源种属广谱Ig或针对一抗亚型的二抗。如一抗是小鼠IgG1，可以选用山羊抗小鼠的Ig或IgG1的二抗。
2.3 正确使用：也需要重新选择稀释比例。一般供应商提供稀释比例从1：10稀释度始，作5倍比稀释。
3 检测系统的正确选择
检测系统一般有酶法、荧光法和亲和放大系统：亲和素-生物素放大系统很常用，但由于内源性亲和素和生物素广泛存在，经典的SP、SRABC和LSAB法等常出现背景着色，尤其是内源性生物素丰富的肝、肾染色时很难避免。Zymed公司研发的非生物素放大试剂盒NAB和Picture Plus试剂盒，采用多聚氨基酸支架偶联多个抗体和酶、荧光素等信号检测分子起到良好的放大效果，具有高敏、背景清晰等优点。对于啮齿动物组织的免疫化学检测：由于啮齿动物非特异性结合强，最好选用美国Vector公司和Zymed公司都有开发的用小鼠抗体检测小鼠组织的试剂盒。 (生物秀实验频道 www.bbioo.com)
购买时要求试剂公司提供标准化的试剂，并附详细的试剂说明书，例如抗体的说明书应包括抗体的来源、免疫球蛋白的亚类、单抗或多抗、使用稀释度、使用流程和注意事项、洗涤时缓冲液的适宜离子强度和PH值等。经广泛的文献查阅及与使用者的多次交流，这里特别推荐Sigma公司，Santa Cruz公司，北京中山生物技术有限公司，武汉博士德生物工程有限公司，福州迈新生物技术有限公司。
(二)试剂保存
1 抗体试剂保存
抗体储存容器应由不吸附蛋白质的材料制成，常用的有聚丙烯，聚碳酸酯和硼硅酸玻璃。抗体浓度越高（浓度大于10mg/ml），越稳定，易保存；浓度低时，应加0.1%-1.5%的牛血清白蛋白作保护剂；必要时需要加0.01-0.15％NaN3防腐剂以延长保存时间。酶标记抗体在应用防腐剂时要注意不能用NaN3，否则会抑制酶的活性。抗体浓缩液应在-20℃保存，可以长达两年；用时取出，室温融解，如一次或短时间用不完，应进行小量分装，－20℃保存，避免反复冻融；融解后抗体于2－8℃可以保存一个月。稀释的抗体不能长时间保存，在4℃下可存放1-3天，超过7天效价显著降低。用作抗体的稀释液，在夏天温度很高时，最好加入少许防腐剂如叠氮钠、柳硫汞等，以免在切片上作用时间超过10小时而生霉菌。
2 试剂盒保存
完整试剂盒未打开前于2－8℃可以保存一年，打开后，应根据说明书要求对具体试剂进行适当存放。一般标准品应放置－20℃，用不完的抗体试剂应小量分装－20℃保存。
综上，由于免疫组织化学技术的高特异性、高敏感性，集形态、功能、代谢与一体，及其操作简单、试剂来源稳定、价格适中等特点，都使得其广泛地应用于生物医学研究及临床病理诊断中。我们也有理由相信，随着更多新技术的涌入及改善，这门新型的技术将发挥越来越巨大的作用。
