除上述两种切片方法外，还有振动切片、塑料切片、超薄切片、碳蜡切片等方法。振动切片主要适用于免疫电镜观察，塑料切片的优点是可以同时作光镜和电镜检测，超薄切片用于电镜标本的制作，碳蜡切片操作简便省时、抗原性保存比石蜡切片好且组织结构清晰，但夏季切片困难。由于后四种切片技术在免疫组织化学技术应用不是很多，所以对其切片的细节注意事项这里不作详细论述。
2 组织切片玻片的处理
2.1 载玻片和盖玻片的清洁
新的玻片上有油污，要用清洁液浸泡12-24小时，自来水冲洗后再用蒸馏水清洗5遍以上，浸泡在95%-100%乙醇内2小时，用绸布擦干或用红外线烤箱烤干即可。
2.2 载玻片涂黏附剂
为防止因冲洗频繁，致切片脱落，清洗干净的玻片上应均匀地涂一层薄薄的黏附剂。所使用的黏附剂应定期更换成或新鲜配制，以确保合乎要求的黏附度。常用的黏附剂有：树脂胶、铬明矾明胶、多聚赖氨酸、甘油明胶、甲醛明胶、APES等。下面具体介绍三种最常用黏附剂的使用注意事项及其优缺点。
2.2.1 Poly-L-Lysine (多聚左旋赖氨酸) 一般采用分子量30000左右的0.5%多聚赖氨酸最好，也可用试剂公司出售的其浓溶液以1：10去离子水稀释。方法是将玻片浸泡其中，倾尽余液，在60℃温箱中烤干备用，此方法的优点是可以用于多种组织化学、免疫组化及分子学检测中的应用，粘贴效果最好，但价格稍贵。
2.2.2 明胶硫酸铬钾法 将2.5g明胶加热溶于500ml蒸馏水中，完全溶解冷却后加入0.25g硫酸铬钾搅匀充分溶解即可使用。方法是将玻片浸泡其中2 min，取出控尽液体入温箱中烤干备用。此法价格便宜、方法简单，任何实验都可以使用，特别适用于大批量的使用，但应注意，如果液体变蓝或粘稠状停用。
2.2.3 APES (3-氨丙基-乙氧基甲硅烷) 此法必须现用现配。将洗净玻片入1:50丙酮稀释的APES中，浸泡20s，取出稍停再入丙酮或蒸馏水中刷去末结合的APES晾干即可。用此方法粘合的玻片应垂直烤片不能平拷，否则组织片中易出现气泡。
三、免疫组织化学技术细节处理各论
（一）免疫荧光细胞组织化学技术-细节注意
1 荧光显微镜标本制作要求
1.1 载玻片 必须光洁，厚度均匀（0.8-1.2mm），无明显自发荧光。
1.2 盖玻片 光洁，厚度在0.17mm左右。
1.3 封固剂 必须无自发荧光，无色透明，常用甘油和0.5mol/L PH9.0-9.5碳酸盐缓冲液的等量混合液作封固剂。
1.4 标本 组织切片或其他标本不能太厚，如太厚激发光大部消耗在标本下部，而物镜直接观察到的上部未充分激发。另外，细胞、组织重叠或杂质掩盖影响判断。
1.5 镜油 一般暗视野荧光显微镜和油镜观察标本时，必须使用镜油，最好使用特制的无荧光镜油，也可以用缓冲甘油代替。液体石蜡也可用，但折光率较低，对图象质量略有影响。
2 荧光染色注意事项
2.1 染色反应最好在湿盒内进行，以免标本上的试剂干燥，造成非特异性染色。
2.2 染色反应的酸碱度以接近体液环境为宜（PH7.4左右），因此，切片冲洗液及抗体稀释
液均应注意酸碱度的调整。
2.3 组织细胞要求新鲜，因此冰冻切片是免疫荧光染色的首选方法，同时注意避免切片折叠
或杂质过多，以免影响荧光的观察。
2.4 切片经染色后，应及时观察并照相，不宜长期保存，以免褪色。切片在4℃冰箱内过夜，其荧光强度将减弱约30%。
2.5 抗体稀释度以获得最佳染色效果，背景非特异性染色最小为标准，因此对每一批抗体必
须试验摸索，找出最佳稀释浓度。
2.6 为防止抗体效果下降，所购抗体应及早试验，并应尽量减少抗体溶液的冻溶次数。
2.7 若非特异性染色过强时，在染色反应前应先将荧光抗体离心，去除沉淀物后再使用。
3 使用荧光显微镜注意事项
检查时间以每次1-2h为宜，超过90min，超高压汞灯发光强度逐渐下降，荧光减弱；标本
受紫外线照射15min后，荧光也明显减弱。所以最多不得超过2-3h。
（二）免疫酶细胞组织化学技术
免疫酶细胞组织化学技术与免疫荧光技术相近，所不同的是利用酶标抗体与组织抗原结合后，形成有色沉淀再观察。但与免疫荧光技术相比，该法终产物可在普通光镜下观察，切片能够长久保存，反复观察，适合于镜下半定量分析，DAB终产物具有嗜锇酸性，经锇酸处理后，电子密度增强，可用于电镜观察。技术细节同上述总论中所介绍。(生物秀实验频道 www.bbioo.com)
（三）亲合组织化学技术-细节注意
亲合组织化学技术引入免疫细胞化学后使其敏感性进一步提高，更利于微量抗原（抗体）在细胞或亚细胞水平的检测。目前已经建立的方法有ABC法、LAB法、BRAB法、SPA-HRP法、凝集素法等。这些方法的共同特点是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础的。这里仅介绍最为常用及多见的ABC法。
ABC法即抗生物素-生物素-过氧化物酶法。ABC法是Hsu等于1981年在BRAB法和LAB法的基础上改良的。其特点是利用抗生物素分别连接生物素标记的第2抗体和生物素标记的酶。其第1抗体不为标记物所标记，生物素标记的第2抗体与ABC复合物相连接。ABC复合物是将过氧化物酶结合在生物素上，再将生物素-过氧化物酶连接物与过量的抗生物素蛋白反应而制备的。ABC法的优点是：敏感性强，特异性强，背景染色淡，方法简单，节约时间，并且由于生物素与抗生物素具有和多种示踪物结合的能力，可用于双重或多重免疫染色。
