2.2 mtDNA 的琼脂糖电泳检测结果
最近研究表明[13], 小麦线粒体全基因组为452, 528bp 的环形DNA 分子, 由于其分子质量较大, 要想获得完整的mtDNA, 提取操作中应格外小心, 以防mtDNA 的降解或断裂。用本方法所提取的mtDNA 经琼脂糖电泳检测, 没有降解, 条带清晰(图1:a)。此外, 用黄化苗提取mtDNA 时, 核DNA 和RNA 对mtDNA 纯度有很大影响, 在对线粒体进行裂解前若未用DNaseⅠ消化处理, 所提取的mtDNA 中有细胞核DNA 杂质, 电泳泳道会有明显拖尾现象(图1: b); 由于黄化苗组织中所含RNA 也比较丰富, 所提取的mtDNA 若未用 RNase A 处理, 电泳图中明显可见有RNA混杂(图1: b)。
图1 mtDNA 的琼脂糖电泳图
a:1. ms(Ae.kotschyi)-90-110; 2. ms(Ae.variablis)-90-110; 3. ms(Ae .ventricosa)-90-110; 4. ms(Ae.bicornis)-90-110.b:1.用RNase A 和Dnase I 处理过的mtDNA; 2. 未用RNase A 处理的mtDNA; 3.未用DNaseⅠ处理的mtDNA。
Fig. 1 Agarose gel electrophoresis patterns of mtDNA
a:1. ms(Ae.kotschyi)-90-110; 2. ms(Ae.variablis)-90-110; 3. ms(Ae .ventricosa)-90-110; 4. ms(Ae.bicornis)-90-110.b:1. mtDNA of RnaseA
and Dnase I treatment; 2. mtDNA without RNaseA treatment; 3. mtDNA without Dnase I treatment.
2.3 mtDNA 的RAPD 分析
用随机引物OPY-01(5′-GGTGGCATCT-3′)对24个材料的mtDNA 进行RAPD 扩增(图２), 平均每个材料可扩增出5~9 条带, 扩增片段介于250~4,250 bp, 其中Ae.kotschyi、ms(Ae.kotschyi)-90-110、ms(Ae.kotschyi)-90-110×5253 之间存在多态性, 这种多态性为研究小麦细胞质雄性不育机理可提供翔实的线粒体变异的资料。
图2 mtDNA 的RAPD 扩增图谱
数字对应材料编号参见表1; M1、M2; 标准分子量。
Fig . 2 RAPD amplification patterns of mtDNAs from 24 materials using primer OPY-01
Numbers refer to the codes listed in Table 1; M1 and M2 stand for molecular marker.
表2 不同裂解温度下的mtDNA 提取效果
Table 2 The comparison of mtDNA extracted at different lysis temperature
