（五）丙二醛含量的测定
正常情况下由于植物体内活性氧的产生与清除处于平衡状态，不会导致植物伤害。但在低温胁迫环境下，植物器官往往发生膜脂过氧化作用，丙二醛（MDA）是膜脂过氧化的最终分解产物，常用作测定膜脂过氧化的指标。
在酸性和高温度条件下，可以与硫代巴比妥酸（TBA）反应生成红棕色的三甲川（3,5,5-三甲恶唑2,4-二酮），其最大吸收波长在532nm。但是测定植物组织中MDA时受多种物质的干扰，其中最主要的是可溶性糖，糖与TBA显色反应产物的最大吸收波长在450nm，532nm处也有吸收。植物遭受低温胁迫时可溶性糖增加，因此测定植物组织中MDA-TBA反应物质含量时一定要排除可溶性糖的干扰。低浓度的铁离子能够显著增加TBA与蔗糖或MDA显色反应物在532、450nm处的消光度值，所以在蔗糖、MDA与TBA显色反应中需一定量的铁离子，通常植物组织中铁离子的含量为100～300μg/g DW，根据植物样品量和提取液的体积，加入Fe3＋的终浓度为0.5μmol/L。
A．直线回归法
MDA与TBA显色反应产物在450nm波长下的消光度值为零。不同浓度的蔗糖（0-25 mmol/L）与TBA显色反应产物在450nm的消光度值与532nm和600nm处的消光度值之差成正相关，配制一系列浓度的蔗糖与TBA显色反应后，测定上述三个波长的消光度值，求其直线方程，可求算糖分在532nm处的消光度值。UV-120型紫外可见分光光度计的直线方程为：
Y532＝-0.00198＋0.088D450 ……………………………………①
B．双组分分光光度计法
据朗伯-比尔定律：D＝kCL，当液层厚度为1cm时，k＝D/C，k称为该物质的比吸收系数。当某一溶液中有数种吸光物质时，某一波长下的消光度值等于此混合液在该波长下各显色物质的消光度之和。
已知蔗糖与TBA显色反应产物在450nm和532nm波长下的比吸收系数分别为85.40，7.40。MDA在450nm波长下无吸收，故该波长的比吸收系数为0，532nm波长下的比吸收系数为155，根据双组分分光度计法建立方程组，求解方程得计算公式：
C1（mmol/L）＝11.71D450 ……………………………………………………②
C2（μmol/L）＝6.45（D532-D600）-0.56D450 …………………………………③
式中C1为可溶性糖的浓度，C2为MDA的浓度，D450、D532、D600分别代表450nm、532nm和600nm波长下的消光度值。
0.6%硫代巴比妥酸：称取硫代巴比妥酸，先加少量氢氧化钠（1mol/L）溶解，再用10%的三氯乙酸定容。
1．MDA的提取
称取样品１g，加入2ml10%TCA和少量石英砂，研磨至匀浆，再加8ml TCA进一步研磨，匀浆在4000×g离心10分钟，上清液为样品提取液。
2．显色反应和测定
吸取离心的上清液2ml（对照加2ml蒸馏水），加入2ml 0.6%TBA溶液，混匀物于沸水浴上反应15min，迅速冷却后再离心。取上清液测定532nm、600nm和450nm波长下的消光度。
3．计算含量
（1）直线方程法
按公式①求出样品糖分在532nm处的消光度值Y532，用实测532nm的消光度值减去600nm非特异吸收的消光度值再减去Y532，其差值为测定样品中MDA-TBA反应产物在532nm的消光度值。按MDA在532nm处的毫摩尔消光系数为155换算求出提取液中MDA浓度。
（2）双组分分光光度计法
按公式③可直接求得样品提取液中MDA的浓度。
用上述任一方法求得MDA的浓度，根据样品的重量计算测定样品中MDA的含量：
MDA含量变化与植物的抗寒性呈负相关，如果某一品种MDA含量在低温时巨增出现的早，说明抗寒性较差。反之，抗寒性就强。
（六）可溶性糖含量的测定
可溶性糖一方面是原生质代谢可直接利用的原料，另一方面可溶性糖又增加了原生质的浓度，使冰点降低，又可缓冲细胞质过度脱水，保护细胞质胶体不致遇冷凝固，减少细胞内失水和结冰，因而提高植株的抗寒性。
