②隔层胶的配制
按表5－4进行隔层胶的配制，用刻度吸管准确吸取30%Acr－0.8%Bis和1M Tris-HCl（pH6.8）于抽滤瓶中，用电动吸引器减压抽气，与此同时，吸去分离胶上层的水层，抽气毕，加入1%过硫酸铵溶液和TEMED，立即灌注隔层胶（凝胶板需要迅速加入蓖子），其中加一水层，约1h可聚合好。
表5－4隔层胶的配制
TEMED（四甲基乙二胺）也可用DMPN（二甲氨基丙晴）或TEOA（三乙醇胺）替代。
（3）加样
装置好垂直板电泳槽，用1%热琼脂封好缝隙。
样品制备：每克鲜样加3.0ml 0.1mol/L的磷酸缓冲液（pH＝7.0），研磨，用纱布粗过滤，滤液离心：4000r/min，（0±2）℃，取上清液作供试酶液。
用10伏/厘米预电泳三分钟后，用微量进样器吸取样品液分别每管加入50微升。
（4）电泳
加样毕，注电极缓冲液入上、下电泳槽，在上槽中加入一滴溴酚蓝。接通电源，上槽为负极，下槽为正极。调节电流为2毫安/厘米（2毫安/管），在冰箱内进行。待溴酚蓝迁移至下端约0.5～1cm处停止电泳，约2h。
（5）染色
将脱下的凝胶，用去离子水冲洗凝胶板后，放入长方型白瓷盘中染色。
A．染色贮液配制
① 0.2M醋酸钠溶液：称2.8g醋酸钠溶于100ml重蒸水中。
② 5mM硫酸锰溶液：称取0.168g硫酸锰，溶于200ml重蒸水中。
③ 联苯胺溶液：称0.5g联苯胺，溶于10%冰醋酸250ml中。
④ 愈创木酚溶液：称1.35g愈创木酚，溶于250ml10%醋酸中。
以上四种溶液放冰箱中长期备用。
⑤ 0.12%H2O2：凝胶洗出后才加。随配随用。
B．染色配比
①：②：③：④：⑤＝20：2：5：8：5
C．染色
将配好的染色液倒入白瓷盘内凝胶板上，37℃保温30min，酶带呈紫红色。取出漂洗后，7%醋酸中保存。
过氧化物酶同工酶显色2～3d更为清楚，在暗室用透光照相的方法效果较好。也可用280mm波长下用光密度计扫描定量。
（6）同工酶带相对迁移率计算
研究表明，过氧化物同工酶与植物抗寒性的关系极为密切，抗寒性强的品种的同工酶带一般比抗寒性差的品种多1～3条，且随着温度下降变化缓慢。
