3．显色反应
3ml反应液为0.05mol/L磷酸缓冲液1.5ml，750umol.L-1NBT溶液、130mmol/L甲硫氨酸（MET）溶液、100umol/L乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2）液、20umol/L核黄素各0.3ml，蒸馏水0.25ml和0.05ml酶提取液（对照管加蒸馏水）。混匀后将１支对照管置暗处，其它各管于4000lx日光灯下反应20min（要求各管受光情况一致，温度高时间缩短，低时间延长）。
4．SOD活性测定与计算
反应结束后，以不照光的对照管做空白，分别测定其它各管的光吸收，已知SOD活性单位以抑制NBT光化还原的50%为一个酶活性单位表示，按下式计算SOD活性。
式中：SOD总活性以每克鲜重酶单位表示；比活力单位以酶单位/mg蛋白表示；
ACK—照光对照管的光吸收值；
AE—样品管的光吸收值；
V—样液总体积（cm3）；
Vt—测定时样品用量（cm3）；
W－样重（g）；
蛋白质浓度单位为：mg蛋白/g样重。
研究表明，当遭受低温胁迫时，引起SOD活性的下降，下降的百分率与品种抗冷性呈负相关，故能反应品种间抗冷能力的高低。
（三）过氧化氢酶（CAT）活性的测定
低温胁迫下，细胞内易产生H2O2破坏膜系统的稳定，而过氧化氢酶（CAT）能把H2O2分解为H2O和O2，从而清除H2O2维护膜的稳定性。研究表明，抗寒性强的品种有较高的过氧化氢酶活性，且随温度下降，以抗寒性强的品种下降幅度小，与抗寒性呈显著性相关。
CAT酶活性大小可用一定时间内分解的H2O2量来表示。在反应系统中加入一定量（反应过量）的H2O2溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的H2O2，即可求出被CAT分解的H2O2量：
1．试剂配制
10%H2SO4；0.2mol/L 磷酸缓冲液（pH＝7.8）；
0.1mol/L 高锰酸钾标准液：称取KMnO4（AR）3.160g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml，用0.1mol/L草酸标定；
0.1mol/L H2O2：取30%H2O2溶液5.68ml，稀释至1000ml，用标准0.1mol/L KMnO4溶液在酸性条件下标定。
2．酶液提取
取剪碎的样品2.5g加入磷酸缓冲液（pH7.8）少量，研磨成匀浆，转移到25ml容量瓶中，将研钵冲洗干净，冲洗液转至容量瓶中，并用同一缓冲液定容，4000×g离心10min，上清液为酶粗提液。
3．酶液滴定
取50ml三角瓶4个（两个测定，两个对照），测定加入酶液2.5ml，对照为煮死酶液2.5ml；再加入2.5ml 0.1mol/L H2O2，同时计算时间，于30℃恒温水浴中反应10min，立即加入10%H2SO4 2.5ml。然后用0.1mol/L KMnO4滴定，至出现粉红色（30min内不消失）为终点。
4．结果计算
酶活性用每克鲜重样品在10min内分解H2O2毫克数表示。
A－对照KMnO4滴定ml数；
B－酶反应后KMnO4滴定ml数；
V－酶提取液总量（ml）；
a－反应所用酶液量（ml）；
W－样重（g）。
