三、方法步骤
（一）质膜透性测定－电导法
近年来的研究表明，在低温伤害尤其冷害中，膜系统常常是最先受到伤害的部位，寒害能使脂膜受损伤，透性加大，细胞内离子（主要是K＋离子）外渗量增多，电导率加大。因此可以用电导仪测定溶液的电导率，求算电解质渗出率（或称伤害率）。伤害率愈高则愈不抗寒，反之则愈抗寒。
1．电解质渗出率的测定
取处理和对照样品各0.5g，放入试管中，加10ml去离子水，置25℃下10h。用玻璃棒搅拌均匀，然后用电导仪测电导值分别为T1和C1。再将试管放入沸水中10min，待其冷却至25℃时，测得处理和对照得电导值为T2和C2，按下式计算电解质渗出率和伤害度：
2．绝对电解质渗出量的测定
有时为了求得电解质的绝对渗出量，需要用分析纯的KCl配成不同浓度的标准液（0.01－10mmol/L），在25℃下测定其电导率值，并绘制电导率（μS/cm）—浓度（mg/ml）标准曲线。由标准曲线查知样品的外渗电导率值相当于KCl的浓度，再折算每克材料的绝对外渗量（mg/g），即
绝对电解质渗出量（mg/g），即
绝对电解质渗出量（mg/g）＝A×B/W
式中，A—根据样品电导率值，从标准曲线中查出的与KCl相当浓度（mg/ml）；
B—浸泡液的体积（ml）；
W—样品鲜重（g）。
2．注意事项
（1）在电导测定中一般应用去离子水，若制备困难可用普通蒸馏水代替，但在测定中设一空白试管，测定样品时要同时测定其空白电导值，按下式计算相对电导度：
（2）CO2在水中的溶解度较高，在测定电导时要防止高CO2气源和口中呼出的CO2进入试管，以免影响结果的稳定性。
（3）温度对溶液电导影响很大，故S1与S2必须在相同温度下测定。
（二）超氧物歧化酶（SOD）测定
超氧物歧化酶（SOD）是一种清除超氧阴离子自由基的酶，普遍存在于植物体内。本实验依据超氧物歧化酶抑制氮蓝四唑（NBT）在光下的还原作用来确定酶活性大小。在有可氧化物质存在下，核黄素可被光还原，被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生超氧阴离子自由基，超氧阴离子自由基可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲月朁 ，后者在560nm处有最大吸收。而SOD可清除超氧阴离子自由基从而抑制了甲月朁 的形成。于是光还原反应后，反应液蓝色愈深说明酶活性愈低，反之酶活性愈高。据此可以计算出酶活性大小。
1．试剂配制
0.05mol/L磷酸缓冲液（pH7.8）
130mmol/L甲硫氨酸（Met）溶液：称1.9399g Met用磷酸缓冲液定容至100ml。
750μmol/L氮蓝四唑（NBT）溶液：称取0.06133g NBT用磷酸缓冲液定容至100ml避光保存。
100μmol/L EDTA-Na2溶液：称取0.03721g EDTA-Na2用磷酸缓冲液定容至1000ml。
20μmol/L核黄素溶液：称取0.00753g核黄素定容至1000ml避光保存。
2．酶液提取
称取处理和对照样品各0.5g，加入5ml磷酸缓冲液，冰浴研磨提取，然后15000rpm离心10min，所提上清液为酶液。
