2．游离脯氨酸的提取
称取0.3g叶片鲜样（来自经干旱处理和对照的不同材料），剪碎后放入具塞试管中，加5ml 3%磺基水杨酸溶液，加塞后在沸水浴中提取10min，过滤液待测。
3．游离脯氨酸的测定
取提取液2ml于具塞试管中，加入2ml蒸馏水、2ml冰醋酸和4ml酸性茚三酮试剂，摇匀后在沸水浴中加热显色2h，取出后冷却至室温，加入4ml甲苯，充分摇匀以卒取红色产物。静置约10min，吸取甲苯层，于分光光度计520nm波长处测定吸光度。(生物秀实验频道 www.bbioo.com)
4．计算样品中的脯氨酸含量
脯氨酸含量（μg/g）＝（C×V/A）/W
或
脯氨酸含量（%）＝（C×V/A）/W×10-4
式中：C—由标准溶液查得脯氨酸μg数；
V—提取液总体积（ml）；
A—测定液总体积（ml）；
W－样品重（g）；1g＝106μg。
对许多植物的研究表明，在水分胁迫时，出现游离脯氨酸的大量积累，所以很多研究者主张可将脯氨酸积累的数量作为植物抗旱性的指标。但是，也有些研究表明，各种植物（包括小麦）品种在水分胁迫时，脯氨酸的积累有很大差异，有些抗旱品种在轻度干旱胁迫时脯氨酸含量并不增加，而一些不抗旱品种，器官组织内部水势下降快，游离脯氨酸积累也快。因此，用脯氨酸积累作为抗旱鉴定指标时，应结合其它抗旱鉴定指标一起评价。
（五）甜菜碱含量的测定
甜菜碱最早在旱生植物宁枸杞中发现，已知有12种，目前研究最多的是甘氨酸甜菜碱（Glycine betaine），简称甜菜碱，它广泛存在于开花植物的各器官。甜菜碱在细胞内的积累可提高细胞的渗透调节能力，稳定细胞内大分子蛋白质与生物膜的结构和功能，还可保护细胞内许多重要代谢活动所需酶类的活性。作为一种非毒性的渗透调节剂，甜菜碱在植物抗逆生理中起着非常重要的作用，研究表明，甜菜碱的积累水平与植物抗胁迫能力成正比。
1．溶液配制
雷氏盐溶液：精密称取1.5g雷氏盐，加水至100ml，用盐酸调pH值为1，室温搅拌45min，须在用前配制。
甜菜碱提取液：甲醇：氯仿：水=12：5：3（V/V）。
甜菜碱标准液：精密称取甜菜碱100mg，用蒸馏水移入100ml容量瓶中，待完全溶解后稀释至刻度，即得浓度为1mg/ml的标准液。
2．标准曲线绘制
标准曲线的绘制，将标准液按每毫升含0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg配制溶液，吸取以上溶液各3.0ml，水浴放置3h，用G3垂熔玻璃漏斗过滤，3×3ml乙醚洗沉淀，待乙醚挥干，用3×5ml 70%丙酮溶液解沉淀并转移至25ml容量瓶中，用70%丙酮溶液补充至刻度，用70%丙酮溶液作空白，在525nm处测其吸光度。
3．甜菜碱的提取
称取1g左右小麦叶片（来自经干旱处理和对照的不同材料），加入10ml甜菜碱提取液，研磨，研磨液于温水浴中保持10min，冷却后于20oC离心10m分钟，收集上层水相，下层氯仿相再加入10ml提取液（甲醇:氯仿:水=12:5:3（V/V））；再离心，取上层水相，下层加入4ml50%甲醇，离心，然后将上层水相合并，调PH5～7，70oC蒸干，再用5ml水溶解。
4．甜菜碱的测定
吸取待测液3.0ml，水浴放置10min，取出，滴加5ml雷氏盐溶液，冷水浴放置3h，用G3垂熔玻璃漏斗过滤，乙醚洗沉淀，待乙醚挥干，用70%丙铜溶液溶解沉淀并转移至25ml容量瓶中，用70%丙酮溶液补充至刻度。70%丙酮溶液作空白，在525nm处测其吸光度光度，由标准曲线中查出甜菜碱的含量。
植物体内超氧物歧化酶活性、丙二醛含量及植物组织浸泡的电导率等生理生化指标也可作为抗旱鉴定评价指标，具体测定方法见本教程的实验40，在此不再详述。
三、作业思考题
1．分析比较植物抗旱性鉴定的各种方法的有效性，你认为鉴定植物抗旱性时应注意什么问题？
2．在进行游离脯氨酸含量的测定时，若改变萃取剂，则比色应做哪些改变？如何选择
最适波长？如何选择最佳萃取剂？(生物秀实验频道 www.bbioo.com)
