三、转染细胞
由于siRNAs是进入细胞后才能对蛋白的表达进行抑制，因此如何高效地将siRNAs转入细胞也是成功抑制基因表达的关键步骤。例如，一个siRNA分子对某特定基因的抑制效率为90%，而转染效率为10%，那么最后抑制蛋白表达最后的效率只有9%，可见如何提高siRNAs的转染效率非常重要。目前传统转染方法与转染试剂盒很难达到高效率的siRNAs转染，效果都不理想。QIAGEN公司的RNAiFect是专门的RNAi转染试剂，它的原理基于脂质体技术，适用于多种真核生物细胞，如AGS，HEK-293，HeLaS3，Huh-7，HUVEC，NIH-3T3等等（具体效果见Figure 1）。而且该试剂的细胞毒性很低（Figure 6）。
Figure 6. Cells were transfected and LDH activity in the cell culture supernatants was tested 48 hours later, using a colorimetric assay according to the manufacturer’s protocol. LDH activity in the cell culture supernatant of untransfected cells lysed by detergent was set to 100%. Background LDH activity was measured in untransfected and untreated cells, and this value was subtracted from all other measurements.
对于siRNA表达载体与表达框架等DNA的转染，可以选用常规的DNA转染试剂。
四、分析RNAi的效果
RNAi分子水平的检测主要通过mRNA和蛋白两个方面进行检测。对于mRNA，可以采用 RT-PCR，定量PCR，或Northern杂交等，通过信号强弱判断目的基因的沉默效果。由于生命的执行者是蛋白，因此还需要对蛋白水平进行检测，可通过Western杂交，ELISA，免疫荧光等。当然RNAi最大以及最终的效果是细胞的代谢过程、生理生化系数等表型参数发生明显的变化。
与传统的基因敲除等基因沉默技术相比，RNAi技术具有投入少，周期短，操作简单等优势。近来RNAi成功用于构建转基因动物模型的报道也日益增多，标志着RNAi将成为研究基因功能不可或缺的工具。不仅如此，RNAi技术还将可能成为研究细胞信号传导通路与基因治疗的新途径。
