²冻存结果
如此冻存的细胞，其存活率可达90%以上。
²讨论
玻璃化冻存法对细胞活性的保存具有较好的效果，不需要复杂的仪器设备，具有液氮储存设备即可使用。目前，该方法已在胚胎冷冻方面得到广泛应用，但很少应用于一般细胞的冻存。这可能与需要配制较复杂的冻存液以及冷冻前和复苏后较烦琐的操作有关。
因为玻璃化冷冻保护液中的冷冻保护剂的浓度较高，室温下对细胞具有毒性（但在4℃时毒性大为减弱）。所以，冷冻保护液的滴加全过程必须在4℃冰浴中进行。另外，滴加速度要缓慢，如果滴加速度过快，则在细胞外产生很高的渗透压，造成细胞膜的损伤，导致细胞死亡，故要缓慢滴加，让冷冻保护剂有足够的时间缓慢渗透到细胞内，达到细胞内外的平衡。
冻存细胞的复苏
¨非玻璃化冻存的复苏方法
²主要材料
（1） 仪器设备：恒温水浴箱、高速离心机；
（2） 培养用液：完全培养液。
² 复苏过程
（1） 调配37℃～40℃的温水，或将恒温水浴箱的温度调节至37℃～40℃；
（2） 从液氮中取出冻存管，立即投入37℃～40℃ 温水中迅速晃动，直至冻存液完全溶解；
（3） 将细胞冻存悬液转移到离心管内，加入约5ml培养液，轻轻吹打混匀；
（4） 将细胞悬液经800～1000r/min离心5min，弃上清夜；
（5） 向细胞沉淀内加入完全培养液，轻轻吹打混匀，将细胞悬液转移到培养瓶内，补足培养液进行培养。
² 结果
复苏后的细胞应该保持其冻存时的活力，活细胞数达90%以上。
² 讨论
细胞冻存悬液一旦融解后，要尽快离心除去冷冻保护液，防止冷冻保护剂对细胞产生毒性。实验人员在复苏细胞过程中，同样应具有自我保护意识，避免被液氮冻伤。
n 玻璃化冻存的复苏方法
以下以人的单核细胞为例说明其过程（Takhashi et al. 1986）。
² 主要材料
（1）设备：高速离心机；
（2）培养用液：添加20%胎牛血清的Hanks平衡盐溶液、培养液。
² 操作过程
(1) 将冻存管从液氮中取出，立即投入冰浴中5min。复温速率约560℃/min。一次可以进行多个冻存管的复苏；
(2) 将冻存管两端剪断，可以将5ml细胞冻存悬液转移到50ml离心管中；
(3) 沿离心管壁缓慢加入已在冰浴中预冷的含20%胎牛血清的Hanks平衡盐溶液。前10min以0.2ml/min的速度加入，后10min以0.5ml/min的速度加入，接着的15min以0.75ml/min的速度加入，最后30min以1ml/min的速度加入。全过程约为65min，都在冰浴中进行；
(4) 将稀释后的细胞悬液以400r/min离心5min，去除上清。向细胞沉淀中加入培养液重新悬浮细胞，用于培养。
² 结果
复苏后的细胞应该保存其冻存时的活力，活细胞数达90%以上。
² 讨论
复苏时，冷冻保护液的稀释及去除过程与冻存前冷冻保护液的滴加过程一样，不能在室温下而必须在4℃冰浴中进行，避免在室温下冷冻保护剂对细胞产生毒性。稀释过程也要缓慢进行，保证有足够的时间让冷冻保护剂从细胞内渗出，以达到细胞内外的平衡，避免高渗透压的损伤。
