8.以下由老师完成。用0.5MNaCL__0.5MNaOH溶液融胀20min，再用蒸馏水洗至中性。接着用0.5MHCL溶液融胀20min，再用蒸馏水洗至中性。后用0.5MNaCL__0.5MNaOH溶液融胀20min，再用蒸馏水洗至中性。最后用0.02M，pH6.5磷酸缓冲液平衡过夜。至此，层析柱准备完毕。
9.剪一片刚好可以覆盖填料平面的滤纸，轻放入填料面。将准备好的层析柱中的缓冲液放出，待液面比填料高出大约只有1cm时，关闭柱开关。用胶头滴管吸取透析后的藻蓝蛋白粗提液，伸入柱液面内，沿管壁以很慢的速度将粗提液滴到液面中部，待液面升高后可以加快滴加速度。待液面离柱口只有大约2cm距离时，把开关完全打开，一边继续滴加粗提液。
现象：开始有颜色分层，由上到下分别为蓝色，绿色，黄色
10.待粗提液液面比填料高出大约只有1cm时，滴加50ml，0.02M，pH6.5磷酸缓冲液冲洗残余粗提液，不要一次加入，应先加少量把残余粗提液冲洗干净(至溶液澄清为止)，再大量加入。最后加入0.5MNaCL—0.02M，Ph6.5磷酸缓冲液（流速：1.0ml/min）。
第一次洗脱后现象：洗脱一段时间后出现红色层，最后出现明显的四个分层，由上到下分别为蓝色，绿色，青色，粉红色。
11.小心观测，待有浅蓝色溶液流出时，马上开始收集，5ml一管（共收集了14管）。由于气温较高，边收集边将收集好的溶液倒入试管，用滤纸封口，排好顺序,贴上标签4℃保存待测。
收集到试管后，试管内溶液的颜色变化：浅→深→浅
12.取出冷冻保存的试管，以磷酸缓冲溶液为空白对照管,用分光光度计测其OD620nm,。实验结果见表1。
13.根据A620nm可知，蛋白含量最高为第4管，取该管溶液稀释后用紫外可见光谱仪作200nm～700nm扫描,测藻蓝蛋白纯度。实验结果见表2及附件。
六、 实验结果
1. 表1：过柱后收集的提取液OD620nm
|
管号 |
A620nm |
|
1 |
1.290 |
|
2 |
2.345 |
|
3 |
2.590 |
|
4 |
2.600 |
|
5 |
2.592 |
|
6 |
2.592 |
|
7 |
2.591 |
|
8 |
2.011 |
|
9 |
0.516 |
|
10 |
0.337 |
|
11 |
0.223 |
|
12 |
0.192 |
| 13 | 0.187 |
| 14 | 0.166 |
2. 表2紫外可见光谱仪测藻蓝蛋白纯度
| 管号 | A280 | A620 | A620/A280 |
| 4 | 1.206 | 0.614 | 0.509 |
