生物秀首页 新闻前沿 产业资讯 实验技术 仪器教程 生物考研 资源下载 生物人 物秀商城 生物论坛 图片 专业 博客 易生物 视频动画
生命科学实验中心
导航: 生物秀 > 实验 > 细胞实验 > 细胞培养 > 正文
  • 倾力提供最优!
  • 生物秀实验频道
培养基手册(MEDIA HANDBOOK)
作者:未知 来源:网络 时间:2007-11-16

    使用DMEM(HED)细胞培养基,在接种后第2天, 80%细胞已伸展并开始分裂增殖,第3天已长成较密单层,细胞贴壁均匀,形态清晰,呈多边形和梭形,细胞间略有空隙,细胞数为7.5 x 106个/ml。在此后转瓶培养的60 d内细胞数保持稳定,无明显增加和减少,无脱落,无明显形态变化,培养液中HBsAg滴度稳定在1:128~1:512之间。
    而使用传统DMEM细胞培养基,只有30%和40%的细胞伸展,至第4天才长成较密单层,小方瓶与双层转瓶结果相同。至30 d 时已长成较厚的复层,并开始大片脱落,细胞数明显减少,HBsAg滴度降低,最低降到1:32 。此后细胞开始重新贴壁、增殖,至45 d左右部分细胞长成单层,一部分细胞因脱落,至60 d时仍未能长满转瓶。
    b)   分泌HBsAg量明显高于传统DMEM细胞培养基组。

    培养基

    DMEM(HED)细胞培养

    DMEM细胞培养

    30次收液中平均HBsA含量

    3.75μg/ml

    3.51μg/ml

    (5) IMDM细胞培养
    IMDM是由Iscove's改良的Eagle培养基,增加了几种氨基酸和胱氨酸量。可用于杂交瘤细胞培养,以及无血清培养的基础培养基。
    (6) RPMI-1640细胞培养
    Moore等人于1967年在Roswell Park Memorial Institute研制,针对淋巴细胞培养设计,BSS+21种氨基酸+维生素11种等,广泛适于许多种正常细胞和肿瘤细胞,也用做悬浮细胞培养
    (7) Fischer’s细胞培养
    用于白血病微粒细胞培养
    (8) HamF10、F12细胞培养
    1963年、1969年由Ham设计,含微量元素,可在血清含量低时用,适用于克隆化培养。F10适用于仓鼠、人二倍体细胞,F12适用于CHO细胞。
    (9)DMEM/F12细胞培养
    DMEM和F12细胞培养基按照1:1比例混合效果最佳,营养成分丰富,且可以使用较少血清,或作为无血清培养基的基础培养基。
    1.低血清细胞培养
    血清对于在传统培养基配方中生长和增殖的大多数细胞系来说是必不可少的。大部分的组织培养研究者非常熟悉血清添加物给予基本培养基配方的良好生长支持特征。然而,伴随血清的使用也带来了很多的问题。
           费用因素
    生产血清费用高而效率低。小牛血清还必须来源于没有疯牛病、口蹄疫和其它高度传染性疾病的地区。
          差异
    所有的血清都是一种成分不确定的混合物,血清批与批之间的组分存在差异。
            传染源
    动物血清有可能携带传染源,包括支原体、病毒和有毒物质。任何一种传染源可能对正在生长的细胞系或者制品带来风险。
            法规问题
    为了使与传染源相关的风险减少到最低,存在多个国家间进出口生物材料的国际法规。
    为了解决这些问题,清大天一公司开发了多种营养培养基,以最小化和消除与使用动物血清相关的制品安全性问题。
    (1)低血清细胞培养基的原理
    通常在用传统培养基培养细胞时须加入约10%的小牛血清,低血清培养基是在基础培养基中添加了额外的营养成分,使小牛血清的添加量减少50%到70%,而对于细胞生长、增殖、形态和功能有较小或者没有影响。
    (2)    低血清培养基的优点
          小牛血清是细胞培养液成本最大的原料,使用低血清培养基明显地节省培养液成本。
           减少制品纯化损失,提高纯化收率,便于分离纯化。
           减少由于不确定蛋白或者其它血清组分带来干扰和差异的风险。
           提高制品安全性。
          批间差减少或影响降低:
    a) 血清用量减少可以减少使用批次。
    b      血清用量减少使得批间差的影响减少。
           细胞在低血清培养基的生长相当或者优于加入10%小牛血清的传统培养基,没有观察到在细胞形态及增殖方面的显著差异。
    (3)    低血清细胞培养基的应用
        VERO细胞、BHK21细胞等细胞在转瓶、微载体反应器中的培养。
    1.无血清无动物组分细胞培养
    无血清无动物组分细胞培养基意指以该培养基配制的培养液无须添加牛血清即可培养细胞和维持生长收液,且该培养基成分中不含有任何动物来源成分。
    在细胞培养生产生物制品过程中无须添加动物来源成分,避免疯牛病、口蹄疫等传播进入人体,减少人、兽在使用生物制品时的特异性免疫反应、降低产品成本(如降低培养液成本,简化下游纯化工作及提高产品收获量等)。采用生物反应器、无血清无动物来源成分培养基进行细胞培养制药是21世纪生物制药发展趋势;美国FDA和美国农业部已经严格控制在细胞培养中胎牛血清的使用。
    同时,高密度细胞培养并长时间维持细胞密度是高表达率和高产量的关键,只能通过无血清悬浮培养技术来实现。
    为了获得足够的营养成分,无血清无动物组分细胞培养基中氨基酸含量倍增,另外添加了生长因子和/或细胞因子,以及含有个别蛋白或大量蛋白的组分。
    无血清无动物组分细胞培养基通常是特定细胞专用培养基,如无血清无动物组分CHO悬浮细胞培养基适用于CHO悬浮细胞。
    2.替代天然培养基
    培养基中不包含有蛋白、水解产物或未知结构的组分,所有的成分均有已知的化学结构。
     
    (二)细菌培养基
    细菌培养基为肺炎、流脑等细菌培养疫苗生产专用培养基。用于细菌性疫苗大规模生产中细菌体的培养及实验室中细菌体的研究培养。
    目前细菌性疫苗生产厂家及实验室都使用自行配制的培养基进行细菌体的繁殖培养,由于配制工艺的不同、各种培养基组分来源不同,以及培养基中重要活性添加剂来源的质量不稳定性,导致了细菌体繁殖培养的数量和质量不稳定,批间差较大,结果时好时坏,该结果不仅给培养基使用者增加了成本,还严重影响了疫苗生产厂家的产量和质量,延误科研进程。

    上一页  [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] [8] 

关于〖培养基手册(MEDIA HANDBOOK)〗的最新评论
昵称:      评分: 1分 2分 3分 4分 5分
内容:
生物秀实验频道
    没有相关实验
设为首页 | 加入收藏 | 关于我们 | 战略伙伴 | 友情链接 | 法律声明 | 广告服务 | 联系我们 | 网站地图
Copyright © 2003-2008 生物秀 (中国·生物秀科技) 版权所有 信产部备案:鲁ICP备05001831号
客服信箱:info@bbioo.com  客服电话:15800302289  客服QQ:254857951
www.bbioo.com All Rights Reserved.