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培养基手册(MEDIA HANDBOOK)
作者:未知 来源:网络 时间:2007-11-16

    合成培养基使用时加5-30%血清。
    (1) 199细胞培养基及其改良品种
    1950年由Morgan等设计,除BSS外,含有53种成分,添加适量的血清后,可广泛用于多种细胞培养、病毒学、疫苗生产等。
    199(HB)细胞培养基,主要应用于Vero细胞、地鼠肾细胞转瓶培养生产狂犬、乙脑等疫苗,具有高缓冲性能,能够有效提高病毒滴度。
         改良199细胞培养基——199(HB)细胞培养
    狂犬疫苗生产实践证明,199(HB)细胞培养基与传统199细胞培养基相比,具有以下优势。
    a) 细胞生长形态好
    用199(HB)细胞培养基培养的细胞生长速度相对较快,形态良好。

    细胞培养时间

    199(HB)细胞培养

    199培养基

    24小时

    瓶壁铺满85%,良好,状态饱满

    瓶壁铺满85%,良好,状态饱满

    48小时

    瓶壁铺满98%以上,细胞连接紧密,状态饱满

    瓶壁铺满95%以上,形态良好,但细胞间尚有空隙。

    72小时

    细胞铺满整个瓶壁,因有轻微挤压变形成长条形,排列整齐,细胞间界线清晰。

    细胞铺满整个瓶壁,有挤压变形状态。但排列不够整齐,细胞间界线不是很清晰。

    b) 营养液的pH较稳定
    用199(HB)细胞培养基配制病毒维持液pH值较稳定,经过3-4天的细胞培养后pH值变化小。
    c)病毒原液滴度高
    用199(HB)细胞培养基收获的病毒原液相对用199培养基收获的病毒原液平均滴度要高,尤其对二次苗的影响。

    199(HB)培养基

    199培养基

    一次苗滴度

    二次苗滴度

    一次苗滴度

    二次苗滴度

    6.86

    6.43

    6.63

    5.83


    注:一次苗、二次苗分别为第一次和第二次收毒。
    d) 纯化后原液的效力明显提高
    用199(HB)细胞培养基培养后,对纯化后原液的效力影响比较明显,对效力有明显提高。

    培养基

    199(HB)培养基

    199培养基

    平均效力

    4.24

    3.49


    (2)BME细胞培养
    基础Eagle培养基(Basal Medium Eagle),1955年由Eagle设计,BSS+12种氨基酸+谷氨酰胺+8种维生素。简单、便于添加,适于各种传代细胞系和特殊研究用,在此基础上改良的细胞培养基品种有MEM、DMEM、IMDM等。
    (3)MEM细胞培养
    低限量Eagle培养基(Minimal Essential Medium),1959年修改配方,删去赖氨酸、生物素,增加氨基酸浓度,适合多种细胞单层生长,是一种最基本、适用范围最广的培养基,是一种被广泛应用的培养基。
    需要注意的是,MEM细胞培养基有含Earle’s平衡盐的类型,也有含Hanks’平衡盐的类型;有高压灭菌型的,也有过滤除菌型的;还有含非必需氨基酸的类型。生产和科研时,应根据实际情况注意选择合适的MEM细胞培养基。
    另外,因MEM培养基营养成分所限,针对生产之特定细胞培养与表达时,并不一定是使用效果最佳或者最经济的培养基。
    (4) DMEM细胞培养基及其改良品种
    DMEM由Dulbecco改良的Eagle培养基,各成份量加倍,分低糖(1000mg/L)、高糖(4500mg/L)。细胞生长快。附着稍差的肿瘤细胞、克隆培养用高糖效果较好,常用于杂交瘤的骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞培养。例如CHO细胞表达生产乙肝疫苗、CHO细胞表达EPO。 
           改良DMEM细胞培养基——DMEM(HED)细胞培养
    DMEM(HED)细胞培养基,培养CHO细胞生产乙肝疫苗,具有较强细胞维持能力,可增加收液次数,有效提高蛋白表达率。
    生产和试验研究证明,DMEM(HED)细胞培养基在细胞生长和病毒分泌方面均优于使用DMEM细胞培养基。[1]
    a)  使用DMEM(HED)细胞培养基细胞贴壁和长满单层时间明显快于传统DMEM细胞培养基,维持2个月细胞未出现脱落现象。

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