合成培养基使用时加5-30%血清。
(1) 199细胞培养基及其改良品种
1950年由Morgan等设计,除BSS外,含有53种成分,添加适量的血清后,可广泛用于多种细胞培养、病毒学、疫苗生产等。
199(HB)细胞培养基,主要应用于Vero细胞、地鼠肾细胞转瓶培养生产狂犬、乙脑等疫苗,具有高缓冲性能,能够有效提高病毒滴度。
改良199细胞培养基——199(HB)细胞培养基
狂犬疫苗生产实践证明,199(HB)细胞培养基与传统199细胞培养基相比,具有以下优势。
a) 细胞生长形态好
用199(HB)细胞培养基培养的细胞生长速度相对较快,形态良好。
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细胞培养时间 |
199(HB)细胞培养基 |
199培养基 |
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24小时 |
瓶壁铺满85%,良好,状态饱满 |
瓶壁铺满85%,良好,状态饱满 |
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48小时 |
瓶壁铺满98%以上,细胞连接紧密,状态饱满 |
瓶壁铺满95%以上,形态良好,但细胞间尚有空隙。 |
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72小时 |
细胞铺满整个瓶壁,因有轻微挤压变形成长条形,排列整齐,细胞间界线清晰。 |
细胞铺满整个瓶壁,有挤压变形状态。但排列不够整齐,细胞间界线不是很清晰。 |
b) 营养液的pH较稳定
用199(HB)细胞培养基配制病毒维持液pH值较稳定,经过3-4天的细胞培养后pH值变化小。
c)病毒原液滴度高
用199(HB)细胞培养基收获的病毒原液相对用199培养基收获的病毒原液平均滴度要高,尤其对二次苗的影响。
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199(HB)培养基 |
199培养基 | ||
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一次苗滴度 |
二次苗滴度 |
一次苗滴度 |
二次苗滴度 |
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6.86 |
6.43 |
6.63 |
5.83 |
注:一次苗、二次苗分别为第一次和第二次收毒。
d) 纯化后原液的效力明显提高
用199(HB)细胞培养基培养后,对纯化后原液的效力影响比较明显,对效力有明显提高。
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培养基 |
199(HB)培养基 |
199培养基 |
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平均效力 |
4.24 |
3.49 |
(2)BME细胞培养基
基础Eagle培养基(Basal Medium Eagle),1955年由Eagle设计,BSS+12种氨基酸+谷氨酰胺+8种维生素。简单、便于添加,适于各种传代细胞系和特殊研究用,在此基础上改良的细胞培养基品种有MEM、DMEM、IMDM等。
(3)MEM细胞培养基
低限量Eagle培养基(Minimal Essential Medium),1959年修改配方,删去赖氨酸、生物素,增加氨基酸浓度,适合多种细胞单层生长,是一种最基本、适用范围最广的培养基,是一种被广泛应用的培养基。
需要注意的是,MEM细胞培养基有含Earle’s平衡盐的类型,也有含Hanks’平衡盐的类型;有高压灭菌型的,也有过滤除菌型的;还有含非必需氨基酸的类型。生产和科研时,应根据实际情况注意选择合适的MEM细胞培养基。
另外,因MEM培养基营养成分所限,针对生产之特定细胞培养与表达时,并不一定是使用效果最佳或者最经济的培养基。
(4) DMEM细胞培养基及其改良品种
DMEM由Dulbecco改良的Eagle培养基,各成份量加倍,分低糖(1000mg/L)、高糖(4500mg/L)。细胞生长快。附着稍差的肿瘤细胞、克隆培养用高糖效果较好,常用于杂交瘤的骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞培养。例如CHO细胞表达生产乙肝疫苗、CHO细胞表达EPO。
改良DMEM细胞培养基——DMEM(HED)细胞培养基
DMEM(HED)细胞培养基,培养CHO细胞生产乙肝疫苗,具有较强细胞维持能力,可增加收液次数,有效提高蛋白表达率。
生产和试验研究证明,DMEM(HED)细胞培养基在细胞生长和病毒分泌方面均优于使用DMEM细胞培养基。[1]
a) 使用DMEM(HED)细胞培养基细胞贴壁和长满单层时间明显快于传统DMEM细胞培养基,维持2个月细胞未出现脱落现象。


