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培养基手册(MEDIA HANDBOOK)
作者:未知 来源:网络 时间:2007-11-16

    九、培养基的品质
    1.外观
    颜色、粉末细度须均匀。
    2.溶解性
    培养基完全溶解,可以避免培养基内营养成分的流失。
    3.pH值
    哺乳类动物细胞生长需要合适的酸碱度,同时pH值的测定也可以检查培养基的批间差异。 
    4.水分
    培养基的营养成份很丰富,利于微生物的滋长,因此水分的含量控制可以延长有效期。
    5.冰点渗透压
    细胞必须生活在合适的渗透压环境中;同时渗透压值的测定也可以检查培养基的批间差异。
    6.菌落总数
    粉末培养基不是无菌制剂,培养基本身的营养成分很丰富,容易滋生微生物,因此菌落的控制可以延长有效期
    7.细胞生长试验
    可检查细胞培养基是否有促生长的能力,以及是否有不利细胞生长的毒素。
    8.细菌内毒素
    为满足生物制品细菌内毒素的控制要求,作为生物制品生产原料的培养基同样需要细菌内毒素控制。
    9.稳定性
    确定产品的储存、运输条件,产品的保质期限。
    10. 一致性
    验证产品的均一性。

    十、常见问题解答
    1.如何选用培养基?
    选择培养基没有一定标准,有几点建议可供参考:
    (1)建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞首选的培养基。可以查阅文献,或在购买细胞株时咨询。
    (2)本单位惯用的培养基不妨一试,许多培养基可以适合多种细胞。
    (3)根据细胞株的特点、实验的需要来选择培养基。如小鼠细胞株多选1640;进行细胞杂交、基因转移实验,可选择IMDM。
    (4)用多种培养基培养目的细胞,观察其生长状态,可以用生长曲线、集落形成率等指标判断,根据实验结果选择最佳培养基,这是最客观的方法,但比较繁琐。
    2.选择便宜的培养基品种成本就低吗?
    (1)通常,培养基可以适合多种细胞,细胞也可以在不同培养液中生长;例如在MEM中培养的细胞,很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。
    (2)培养基养份不同会导致细胞生长效果不同,病毒或蛋白表达不同,应该选择效果最好的培养基,考虑生物制品的综合成本;
    (3)最终目的是追求生物制品的得率——得率高则成本低。
    3.L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗?它在溶液中不稳定吗?
    L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的,脱掉氨基后,L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源,参与蛋白质的合成和核酸代谢。但L-谷氨酰胺在溶液中不稳定,在高温下会分解成吡咯烷酮和羧酸,也有一些毒降解产物如NH4+会不可逆转地损坏细胞壁。
    L-谷氨酰胺在不同温度、不同pH值条件下的稳定性研究如下。

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