IC50的值是在pH 10.2下测出的，这些数值显示WST-1在这些四唑盐中检测SOD活性的灵敏度最高。由于WST-1的检测灵敏度最高，所以我们用它来检测鼠红血球的SOD活性并同XTT法检测出的数值进行比较。结果，WST-1和XTT法的结果线性相关，相关系数为0.968。（n=7）
最近，Winterbourn博士小组证实了WST-1在SOD活性检测中的用途并发明了一种微孔板方法来检测SOD的活性。这种微孔板法可以用来检测人的红血球，鼠肝和心脏组织匀浆，其检测结果与过去用其他方法所得的结果是十分一致的。如此看来，WST-1在生物样品上的应用是十分广泛的。最近，我们正在研究其在植物组织和食品样本中的用途。
为了得到一个WST-1法的自动分析系统，我们使用了流式注射分析法（FIA）。图7为示意图。
图7. SOD检测的FIA
p, pump; IV, injection valve; D, detector
在该系统中，我们使用了黄嘌呤氧化酶固定受体来避免试验中外源酶的影响，使该系统既快速又经济。在一系列试验之后，我们同时在受体上固定过氧化氢酶并以次黄嘌呤作为底物来增加黄嘌呤氧化酶的稳定性。实验前，我们预先制备了次黄嘌呤和WST-1的混合液，并将其与样品溶液按1：9的体积比混合，然后将20 μl该混合液注入受体。如果样品中不含SOD，那么WST-1的甲臢生成量达到最大值，并可以观察到最大吸收峰。如果样品溶液含有SOD，那么吸收峰会按照SOD的活性相应降低。（图.8）
图8.在最佳条件下获得的SOD反应曲线
A, 0; B, 1; C, 2.5; D, 5; E, 10; F, 25; G, 50; H, 100; I, 250; J, 500ug/ml
SOD的抑制曲线可以由峰值的削减比率所得的抑制率来绘出。从抑制曲线可以看出，IC50为2.7ug/ml,绝对值为50 ng。该数值要比由批量法得到的20ng的值要大许多。但是，FIA法能够让我们在一个小时内检测出超过30个样品，其检测速度可以说是相当快的。我们用该方法检测出了鼠红血球的SOD活性，并将其与NBT法所得的数据进行了比较。（图9）
图9. NBT法和WST-1-FIA法检测兔红血球SOD活性的关系
这两种方法所得的数据是高度相关的，即便这是一种快速检测方法，其结果与其他方法所得的数据还是相当一致的。
结论：
我们已经描述了SOD检测的重要性以及几种测定方法，随着SOD的被发现，每年都会有各种各样的检测系统被发明。这个现状告诉我们目前还没有一个完全令人满意的检测方法。我们所发现的SOD的检测方法（WST-1法）是一种克服了许多常用方法中的常见问题的，颇具吸引力的检测方法。为了将这种方法作为检测SOD的标准方法，我们计划调查作为O2-探针的WST-1的特异性。
本文译自：Assay of Enzyme Superoxide Dismutase (SOD)
作者： Hiroyuki UKEDA, Ph.D.
Department of Agriculture,Khochi University,200 Mononobe Otsu
Nangoku-city, Khochi 783-8502,,Japan
