反应混合液包含2.5 ml 50 mM的碳酸盐缓冲液（B,pH 9.4;C,10.2）或者50 mM的磷酸缓冲液（A,pH8.0）以及3 mM 的EDTA,3 mM的黄嘌呤，56.1 mU/ml的黄嘌呤氧化酶各0.1 ml，0.75 mM的XTT或者NBT以及如横坐标所示浓度的SOD样品溶液。在NBT法中，还需添加0.1 ml的BSA。NBT除了会和黄嘌呤氧化酶反应外还会和葡糖氧化酶反应。我们向含有葡糖氧化酶的葡糖氧化反应液中加入XTT和NBT,然后测量生成的甲臢（图3）。即便是在不生成O2-的葡糖-葡糖氧化酶反应中，NBT还是被还原并生成了甲臢，但是XTT这一方面却没有OD值的增加。最初随着XTT浓度的增加OD值会有所上升，这是因为XTT四唑盐背景OD值所引起的。从这个结果看来，XTT似乎不会和氧化反应过程中所生成的一些酶的还原态有直接的干扰，XTT是一种适合用于SOD检测的探针。
图3 葡糖氧化酶促葡糖氧化反应时NBT与XTT还原的时间曲线
试验混合液（2.8 ml）含有下列成分：50 mM glycine-NaOH(pH 9.5),0.1 mM葡萄糖，0.1 mM NBT(●)，0.1 mM XTT(△)或者0.2 mM XTT(○)。反应从加入葡糖氧化酶后开始。检测25℃下470nm处（XTT）和560nm处（NBT）的吸光度。为了测试XTT对实际样品的可行性，我们用XTT法检测了兔红血球的SOD活性，并和NBT法所得的数据进行比较（图4：试验在pH10.2下进行）
图4. 用XTT法和NBT法所得兔红血球中SOD活性的关系
从红血球中提取的SOD初提物按照常规的方法进行分离。XTT法与NBT法的相关系数为0.954。由XTT法所得的数值大约为NBT法所得数值的2倍，反应了这2种方法的敏感性的不同。接下来，我们用这种方法来检测食品样本中的SOSA。众所周知，食品样本是由多种成份组成的复杂的混合物。红酒、绿茶、咖啡、可可这些样品可以被拿来用XTT检测SOSA，因为这些样品已被证实含有SOSA。如同预期的一样，未经稀释的食物样品的颜色会形成干扰，样品中的物质直接还原了XTT。为了得到10%或者更少的吸光度的变化，茶、红酒、速溶咖啡、可可等需要在pH8下分别稀释100倍，10倍，50倍和10倍。每一种稀释后的样品溶液在每个稀释度上都有超过50%的抑制活性，因此可以证明XTT在检测食物样品中的SOSA时是有用的。这些结果与用ESR所得出的数据是相一致的。从这些结果中我们可以得知XTT不仅可以用于生物样品的检测还可以用于食物样品的检测。
