5、MDCK细胞病毒接种和收获
（1）在低倍光学显微镜下检查MDCK细胞生长状态。
（2）成片的细胞弃生长液，用Hank’s液洗两遍，将残余的牛血清洗净，因牛血清中含有流感病毒非特异抑制素，会影响流感病毒的复制。
（3）每瓶加入接种标本0.5-1.0ml，轻摇细胞瓶，置35℃吸附1-2h。
（4）倒掉感染液，再用Hank’s液洗1–2遍，每瓶加入3ml维持液，置33-35℃培养。
（5）次日起每天检查有无细胞病变（CPE）。CPE特征为细胞肿胀圆化，细胞间隙增大，细胞核固缩或碎裂，严重时细胞部分或全部脱落（见附图）。
（6）收获及红细胞凝集活性（HA）检查：当CPE出现+++～++++号时进行收获，由于CPE无法证实就是流感病毒所造成。最后还得看维持液中是否有红细胞凝集活性（HA），出现细胞凝集的为阳性标本， 收获所有的维持液进行病毒鉴定，也可暂冻存之 。
由于维持液中无牛血清，同时含一定量的胰酶和NaHCO3，故不应在4℃保存，否则易造成HA活性丢失和PH变高。维持液中加适量胰酶的目的是为了提高流感病毒在细胞中复制能力。
（7）传代及盲传：如收获的维持液HA滴度不高或量不够用于鉴定，需在MDCK细胞或鸡胚中传代，把HA滴度提高或增多。
（二）细胞培养中应注意的一些问题
1、消化时间过长（30min-1h）或胰酶保存时间太久，应改变胰酶的浓度或二次消化。
2、细胞的保存问题。取到早代细胞种子时一定要及时地保存起来以防丢失或污染。
3、用Eagle’s液之前请先查明是否已含谷氨酰胺，如不含，应补加之。
4、温度的问题。温度增加2-3℃对细胞产生不良影响，使之在24小时之内死亡。低温对细胞影响较小。细胞一般37℃放7天大部分脱落。室温放10天不但脱落，形态都有一些代谢改变。在4℃放20天细胞能保持良好形态，如需使用时在37℃放置2—3小时即可。
