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实验常用试剂的制备与储藏
作者:佚名 来源:生物秀 时间:2007-10-12

    溶解柠檬酸三钠(二水)和氯化钠于约0.9L水中,加几滴10N NaOH溶液调pH为7.0,用水补足体积至1L。

    DEPC(焦碳酸二乙酯)处理水
    加100ul DEPC 于 100ml 水中,使DEPC的体积分数为0.1%。在37℃温浴至少12h,然后在15 psi 条件下高压灭菌20min,以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反应,不可用DEPC处理Tris缓冲液。

    甲酰胺(deionized formamide)
    直接购买或加Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中,用磁力搅拌器轻轻搅拌1h,可去除甲酰胺中的离子。经Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份,充氮气于-80℃贮存(防止氧化)。

    磷酸缓冲液(phosphate buffer)
    按照下表所给定的体积,混合1 mol/L 的磷酸二氢钠(单碱)和1mol/L 磷酸氢二钠(双碱)贮液,获得所需pH的磷酸缓冲液。配制1 mol/L 的磷酸二氢钠(NaH2PO4·H2O)贮液:溶解138g于足量水中,使终体积为1L;1mol/L 磷酸氢二钠(Na2HPO4)贮液:溶解142g于足量水中使终体积为1L。

    1mol/L 磷酸二氢钠(ml)
    1mol/L 磷酸氢二钠(ml)
    最终pH值
    877
    850
    815
    775
    735
    685
    625
    565
    510
    450
    390
    330
    280
    123
    150
    185
    225
    265
    315
    375
    435
    490
    550
    610
    670
    720
    6.0
    6.1
    6.2
    6.3
    6.4
    6.5
    6.6
    6.7
    6.8
    6.9
    7.0
    7.1
    7.2

    TE(用于悬浮和贮存DNA)

    成分及终浓度 配制100ml溶液各成分的用量
    10mmol/L Tris-HCl
    1mmol/L EDTA
    1ml 1mol/L Tris-HCl(pH7.4-8.0,25℃)
    200ul 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)
    98.8ml

    Tris缓冲液(Tris-HCl buffer)
    将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中,再根据所要求的pH(25℃下)加一定量的浓盐酸(11.6N),用水调整终体积至1L。

    浓盐酸的体积(ml)
    pH
    8.6
    14
    21
    28.5
    38
    46
    56
    66
    71.3
    76
    9.0
    8.8
    8.6
    8.4
    8.2
    8.0
    7.8
    7.6
    7.4
    7.2

    二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液

    电泳缓冲液

    50×Tris-乙酸(TAE)缓冲液

    成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量
    2mol/L Tris碱
    1mol/L 乙酸
    100 mmol/L EDTA

    242g
    57.1 ml的冰乙酸(17.4 mol/L)
    200ml的0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)
    补足1L

    5×Tris-硼酸(TBE)缓冲液

    成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量
    445 mmol/L Tris碱
    445 mmol/L 硼酸盐
    10 mmol/L EDTA

    54g
    27.5g 硼酸
    20 ml的0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)
    补足1L

     

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