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病原微生物检测实验
作者:佚名 来源:生物秀 时间:2007-10-12


    五、实验报告
    (一)菌落计数及报告方法
        用肉眼观察,计平板上的细菌菌落总数,也可用放大镜和菌落计数器计数。记下同一浓度的三个平板上的菌落总数,计算平均值,再乘以稀释倍数即1mL检样中细菌菌落总数。各种不同情况的计算方法如下:
    1首先选择平均菌落数在30~300之间者进行计算,当只有一个稀释度的平均菌落符合此范围时,则以该平均菌落数乘以其稀释倍数报告之(表10-1例1)。
    2若有两个稀释度的平均菌落落在30~300之间,则按两者之菌落总数之比值来决定,若其比值小于2应报告两者之平均数,若大于2则报告其中较小的菌落总数(表10-1例2及例3).
    3若所用稀释度的平均菌落数均大于300,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(表10-1例4).

    4.若所有稀释度的平均菌落数均小于30,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(表10-1例5)。
    5.若所有稀释度的平均菌落数均不在30~300之间,则以最接近300或者30的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(表10-1例6)。
    6.在求同稀释度的平均数时,若其中一个平板上有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌落约为平板的一半,而另一半平板上的菌落数分布很均匀,则可按半平板上的菌落计数,然后乘以2作为整个平板的菌落数。
    7.菌落计数的报告,菌落数在100以内时按实有数报告,大于100时,采用二位有效数字,在二位有效数字后面的位数,以四舍五入方法计算。为了缩短梳子后面的零数,可用10的指数来表示。在报告菌落数位“无法计数”时,应注明样品的稀释倍数。

    (二)大肠菌群测定结果记录
    将10、1、0.1mL水样的发酵管结果查表10-2即得每升样品中的大肠菌群数。
    表10-2  大肠菌群最可能数(MPN)检索表

    阳 性 管 数

    MPN

    100 mL(g)

    95%可信限

    1 mL(g)×3

    0.1 mL(g)×3

    0.01 mL(g)×3

    下限

    上限

    0
    0
    0
    0

    0
    0
    0
    0

    0
    1
    2
    3

    <30
    30
    60
    90

    <5

    90

    0
    0
    0
    0

    1
    1
    1
    1

    0
    1
    2
    3

    30
    60
    90
    120

    <5 130

    0
    0
    0
    0

    2
    2
    2
    2

    0
    1
    2
    3

    60
    90
    120
    160

    .

    .

    0
    0
    0
    0

    3
    3
    3
    3

    0
    1
    2
    3

    90
    130
    160
    190

    .

    .

    1
    1
    1
    1

    0
    0
    0
    0

    0
    1
    2
    3

    40
    70
    110
    150

    <5
    10

    200
    210

    1
    1
    1
    1

    1
    1
    1
    1

    0
    1
    2
    3

    70
    110
    150
    190

    10
    30

    230
    360

    1
    1
    1
    1

    2
    2
    2
    2

    0
    1
    2
    3

    110
    150
    200
    240

    30

    360

    1
    1
    1
    1

    3
    3
    3
    3

    0
    1
    2
    3

    160
    200
    240
    290

    .

    .

    2
    2
    2
    2

    0
    0
    0
    0

    0
    1
    2
    3

    90
    140
    200
    260

    10
    30

    360
    370

    2
    2
    2
    2

    1
    1
    1
    1

    0
    1
    2
    3

    150
    200
    270
    340

    30
    70

    440
    890

    2
    2
    2
    2

    2
    2
    2
    2

    0
    1
    2
    3

    210
    280
    350
    420

    40
    100

    470
    1 500

    2
    2
    2
    2

    3
    3
    3
    3

    0
    1
    2
    3

    290
    360
    440
    530

    .

    .

    3
    3
    3
    3

    0
    0
    0
    0

    0
    1
    2
    3

    230
    390
    640
    950

    40
    70
    150

    1 200
    1 300
    3 800

    3
    3
    3
    3

    1
    1
    1
    1

    0
    1
    2
    3

    430
    750
    1 200
    1 600

    70
    140
    300

    2 100
    2 300
    3 800

    3
    3
    3
    3

    2
    2
    2
    2

    0
    1
    2
    3

    930
    1 500
    2 100
    2 900

    150
    300
    350

    3 800
    4 400
    4 700

    3
    3
    3
    3

    3
    3
    3
    3

    0
    1
    2
    3

    2 400
    4 600
    11 000
    ≥24 000

    360
    710
    1 500

    13 000
    24 000
    48 000

    注1:本表采用3个稀释度(1 mL(g)、0.1 mL(g)和0.01 mL(g)),每稀释度三管。注2:表内所列检样量如改用10 mL(g)、1 mL(g)和0.1 mL(g)时,表内数字应相应降低10倍;用0.1 mL(g)、0.01 mL(g)和0.001 mL(g)时,则表内数字应相应增加10倍。其余可类推。

    (三)沙门氏菌检验结果记录
    观察DHL平板上生长的菌落,挑取可疑菌落接种三糖铁琼脂,记录反应结果,看三糖铁琼脂斜面是否为红色,底部是否变黑并产气。
    六、思考题
    (1)大肠菌群的定义是什么?
    (2)硫代硫酸钠在自来水取样中起什么作用?湖水取样中是否也需用到?
    (3)EMB培养基含有哪几种主要成分?在检查大肠杆菌的时候,各起什么作用?
    (4)DHL平板培养基和三糖铁琼脂内含有哪几种主要成分?各起什么作用?

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