生物秀首页 新闻前沿 产业资讯 实验技术 仪器教程 生物考研 资源下载 生物人 物秀商城 生物论坛 图片 专业 博客 易生物 视频动画
生命科学实验中心
导航: 生物秀 > 实验 > 电泳技术 > 电泳基础知识 > 正文
  • 倾力提供最优!
  • 生物秀实验频道
如何选择层析方法
作者:佚名 来源:生物秀 时间:2007-9-29

    纯化中草药有效成分
    中药的化学成分极其复杂。传统中药多是前熬后服用,有效成分多为亲水,包括生物碱、黄酮、蒽醌、皂甙、有机酸、多糖、肽和蛋白质。灵活及综合地利用多种层析方法,如离子交换、分子筛、反相层析,更容易分离到单一活性成分。Sephadex LH-20葡聚糖凝胶同时具备吸附性层析和分子筛选功能,例如,用甲醇分离黄酮甙,三糖甙先被洗下来,二糖甙其次,单糖甙随后,最后是甙元。Sephadex LH-20可使用水、醇、丙酮、氯仿等各种试剂,广泛用于各种天然产物的分离,包括生物碱、甙、黄酮、醌类、内酯、萜类、甾类等。
    生物碱在酸性缓冲液中带正电,成为盐,HiTrap SP阳离子交换层析柱可以分离许多结构非常相似的生物碱。相反,黄酮、醌类、皂甙、有机酸等可溶预溶于偏碱的缓冲液中,在HiTrap Q阴离子交换柱上分离效果良好。
    一般多糖纯化大多使用分子筛,如Sephadex,Sephacry1。若分子量在60万以下,并需更高等分辨率,可选择新一代的Superdex。一种植物可能含水溶性、酸溶性、碱溶性多种多糖。综合利用分子筛及离子交换层析有助进一步获各组分纯品。另外,多糖药物需去除可引起过敏反应的蛋白质,传统Sevag方法用丁醇脱蛋白需数十次。阴阳离子交换法可以一、两步快速去除多糖中残存的蛋白质。 SURCE 5、15、30RPC反相层析也很适合各种中药有效成分的检测、分离和放大制备。由于中药的成分非常复杂,SURCE反相层析可用范围为PH1-14,并可用1M NaOH、1M HCI清洗、再生。比传统硅胶反相层析更易于工艺优化及在位清洗,寿命也更长。

    纯化肽类
    肽类的来源有天然萃取、合成肽和重组肽三种。肽容易被酶降解,但可以从有机溶剂或促溶剂中复性,所以以高选择性的反相层析如Sephasil 、PepRPC、SOURCE 15RPC、SOURCE 5RPC或离子交换作纯化。Superdex Peptide HR是专为肽分子纯化设计的凝胶过滤预装柱,能配合反相层析作出更精美的肽图。肽分子制备可用离子交换配合凝胶过滤Superdex 30 PG。

    纯化核酸、病毒
    核酸的纯化用于去除影响测序或PCR污染物等研究。核酸可大致分为质粒DNA、噬菌体DNA和PCR产物等。病毒也可视作核酸大分子,和质粒DNA一样,可用分离大分子的Sephacry S-1000 SF、Superose或Sepharoce 4FF凝胶过滤介质去除杂蛋白,再配合离子交换如Mono Q、SOURCE Q分离核酸。

    纯化寡核苷酸
    寡核苷酸多应用在反义(anti-sense)DNA、RNA测序、PCR和cDNA合成等的研究。合成后含三苯甲基的寡聚核苷酸译音离子、以阴离子交换的Mono Q或快速低反压的SOURCE Q在PH12下可去除副产物,并避免凝集和保护基的脱落。载量大大高过反相层析,可用做大量制备。不含三苯甲基的失败序列可用反相柱ProRPC去除。

    脱盐、小分子去处
    使用凝胶过滤介质Sephadex G10、G15、G25、G50等去除小分子,效率高,处理量可达床体积30%。只需在进样后收集1/3-1/2柱体积的洗脱液,就可以去除该填料分离范围上限以下的小分子,简单直接。由于只是去除小分子,柱高10cm以上即可。整个过程一般可于数分钟至半小时完成。Sephadex G25系列介质专为蛋白质脱盐而设计,预装柱HiTrap Desalting(5ml)可用针筒操作。HiTrap Desalting(26ml)可在数分钟为多至10 ml样品脱盐。

    疫苗纯化
    使用凝胶过滤介质Sepharoce 4FF纯化疫苗,去除培养基 杂蛋白,处理量可大于床体积10%。柱高一般40-70cm,整个过程约半至一小时。目前使用该方法生产的疫苗品种有乙肝、狂犬、出血热、流感、肺结核、小儿麻痹疫苗等。分子量较小的疫苗可使用Sephacry S-500 HR,如甲肝疫苗等。

    抗生素聚合物分析
    《中国药典》自2000年版起要求抗生素头孢曲松钠需要找出聚合物占产品的百分比,规定使用Sephadex G10凝胶过滤去测定。

    上一页  [1] [2] 

关于〖如何选择层析方法〗的最新评论
昵称:      评分: 1分 2分 3分 4分 5分
内容:
生物秀实验频道
设为首页 | 加入收藏 | 关于我们 | 战略伙伴 | 友情链接 | 法律声明 | 广告服务 | 联系我们 | 网站地图
Copyright © 2003-2008 生物秀 (中国·生物秀科技) 版权所有 信产部备案:鲁ICP备05001831号
客服信箱:info@bbioo.com  客服电话:15800302289  客服QQ:254857951
www.bbioo.com All Rights Reserved.