EB(Ethidium bromide,溴化乙锭)
溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂,用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA。溴化乙锭用标准302nm 紫外光透射仪激发并放射出橙红色信号,观察琼脂糖凝胶中DNA最常用的方法是利用荧光染料溴化乙锭进行染色,溴化乙锭含有一个可以嵌入DNA堆积碱基之间的一个三环平面基团。它与DNA的结合几乎没有碱基序列特异性。在高离子强度的饱和溶液中,大约每2.5个碱基插入一个溴化乙锭分子。当染料分子插入后,其平面基团与螺旋的轴线垂直并通过范德华力与上下碱基相互作用。这个基团的固定位置及其与碱基的密切接近,导致与DNA结合的染料呈现荧光,其荧光产率比游离溶液中染料有所增加。DNA吸收254nm处的紫外辐射并传递给染料,而被结合的染料本身吸收302nm和366nm的光辐射。这两种情况下,被吸收的能量在可见光谱红橙区的590nm处重新发射出来。由于溴化乙锭-DNA复合物的荧光产率比没有结合DNA的染料高出20-30倍,所以当凝胶中含有游离的溴化乙锭(0.5ug/ml)时,可以检测到少至10ng的NDA条带。溴化乙锭可以嵌入碱基分子中,导致错配。溴化乙锭是强诱变剂,具有高致癌性!会在60-70度是蒸发(所以最好不要在胶太热的时候加,或者应该加到液体里,0.5ug/ml,染色半小时)(当EB加得过多时,也可以在室温用水将已染色的凝胶浸泡20min以降低未结合的EB引起的背景荧光)。
溴化乙锭EB净化和处理方法:
EB是我们从事生命科学尤其是分子生物学经常要接触的致癌性物质,且不好处理.现提供如下方法,供参考。
1 严禁随便丢弃。因为EB是强致癌性,而且易挥发,挥发至空气中,危害很大。
2 废 EB溶液的处理方法
(1) 对于EB含量大于0.5mg/ml的溶液,可如下处理:
a. 将EB溶液用水稀释至浓度低于0.5mg/ml;
b. 加入一倍体积的0.5mol/L KMnO4 ,混匀,再加入等量的25mol/L HCl,混匀,置室温数小时;
c. 加入一倍体积的2.5mol/L NaOH,混匀并废弃。
(2) EB含量小于0.5mg/ml的溶液可如下处理:
a. 按1mg/ml的量加入活性炭,不时轻摇混匀,室温放置1小时;
b. 用滤纸过滤并将活性碳与滤纸密封后丢弃。
3 废EB接触物,如抹布,枪头。
一般回收至黑色的玻璃瓶中,定期进行焚烧处理。
由于EB是一种诱变剂,直接倒入水槽或扔进拉圾箱可能会带来危害,所以应该根据情况处理:
1. 电泳胶
胶里面痕量的EB没有问题,如果小于0.1%可以直接扔掉。而如果发红,即大于等于0.1%时应该放在生物危害柜中焚烧掉。
2. EB溶液
<10ug/ml 时可以直接倒入水槽
>10ug/ml 时应该用木炭过滤或化学方法使其失活(推荐用木炭过滤的方法)
溶液中还有重金属、氢化物、硫化物时应该按照危险垃圾处理
化学中和方法:
方法一:加等体积的漂白粉,搅拌4小时,静置4天,用NaOH调至pH4-9, 倒入排水沟的同时用大量水冲。
方法二:每100ml加5%磷酸,加12ml0.5M的NaNO3,搅拌并静置20小时,同上调pH, 倾倒。
3. 手套、设备等物品
放在医用垃圾中焚烧,如污染严重则用漂白剂处理。
DEPC(diethylprocarbonate焦碳酸二乙酯)
闻起来香香甜甜的,可是害人不眨眼!一种强有力的蛋白质变性剂, 可灭活各种蛋白质,是RNA酶的强抑制剂。而且怀疑是致癌剂.开瓶时将瓶子远离你,并避免接触皮肤。内压可导致溅泼.操作时戴合适的手套,穿工作服,并在化学通风橱里进行DEPC毒性并不是很强,但吸入的毒性是最强的,使用时戴口罩。不小心占到手上注意立即冲洗。
